Name: denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis (urea page)
Uploaded: 2009-10-29T07:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Singapores Academic Research Council (ARC) [licensnummer 90/07]. Vi tackar Radiodurans för stödet.

Den fullständiga och detaljerade text protokoll för detta experimentella proceduren finns i Aktuella protokoll i molekylärbiologi. Detaljerade steg-för-steg-instruktioner för montering av gelsandwichen och gel apparater kan hittas på BioRad webbplats 3. Utrustningskrav: Glasplattor (inre och yttre) 10 cm-cell: 10,1 x 7,3 cm (inre platta), 10,1 x 8,2 cm (yttre platta), BioRad 20 cm-cell: 20 x 20 cm (inre platta), 20 x 22,3 cm (yttre platta), BioRad ...

<ol>
	<li>Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+length+determination+of+small+double-+and+single-stranded+DNA+molecules+by+polyacrylamide+gel+electrophoresis.">Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis.</a> Biochemistry. 14, 3787-3794 (1975).</li><li>Albright, L. M., Slatko, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Denaturing+polyacrylamide+gel+electrophoresis.">Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis.</a> Curr Protoc Nucleic Acid Chem. , (2001).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual. , (2001).</li></ol>

<ol><li> Bandet skärpa beror på flera faktorer. Provmängden lastas för skarpa band bör vara så liten som möjligt, dvs helst mellan 1-5 l. Däremot kan upp till 15 l laddas som fortfarande garanterar godtagbar lösning. Mindre provvolym ger skarpare band. </li><li> Bandet kvalitet är också beroende av gelen tjocklek. Tunnare gel, till exempel 0,75 mm visar bättre resultat än 1,5 mm tjock geler. </li><li> Formen på band kan även påverkas under gel lastning, om provet inte tillämpas lika i gelen fickan. Inklusive 10% glycerol i buff...

denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis (urea page)

Urea sida eller denaturering urea elektrofores polyakrylamidgel sysselsätter 6-8 M urea, som denaturerar sekundära DNA eller RNA strukturer och används för deras separation i en polyakrylamidgel matris baserad på molekylvikt. Fragment mellan 2 till 500 baser, med längd så små som en enda nukleotid, kan separeras med denna metod 1. Migreringen av provet är beroende av den valda akrylamid koncentration. En högre andel av polyakrylamid beslutar lägre molekylvikt fragment. Kombinationen av urea och temperaturer på 45-55 ° C under gelen köra möjliggör separation av ostrukturerade DNA eller RNA-molekyler. I allmänhet denna metod krävs för att analysera eller rena enstaka DNA eller RNA fragment, som syntetiserade eller märkta oligonukleotider eller produkter från enzymatisk klyvning reaktioner. I denna video artikeln visar vi hur du förbereder och kör denaturering gel urea polyakrylamid. Tekniska tips ingår, i tillägg till det ursprungliga protokollet 1,2.

Watch this Scientific Journal Video about Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE at JoVE.com

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE

Denaturering urea polyakrylamidgelelektrofores används för att separera enda DNA eller RNA upp till en gräns på 500 nukleotider. Urea i kombination med värme denaturerar prover och ostrukturerade enstaka delar migrera inom gelmatrisen enligt deras molekylvikt.

Denaturering Urea polyakrylamidgelelektrofores (urea SIDA)

Urea PAGE or denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis employs 6-8 M urea, which denatures secondary DNA or RNA structures and is used for their ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Urea PAGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturering Gradient gelelektrofores (DGGE)

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

Optimerad Fibrin Gel Bead-analys för studier av angiogenes

Angiogenesis is a complex multi-step process, where, in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature.  These ...

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

Bedöma Neurala Motility Stem Cell Använda en agarosgel-baserade mikroflödessystem enhet

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Screening för Amyloid aggregation av Semi-Denaturering Tvättmedel-agarosgelelektrofores

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Snabb och känslig Kolloidal Coomassie G-250 Färgning för proteiner i polyakrylamidgeler

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis (BN-PAGE) for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis BN-PAGE for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

Blå Native polyakrylamidgelelektrofores (BN-PAGE) för analys av Multiproteinkomplex från Cellular Lysates

Multiprotein complexes (MPCs) play a crucial role in cell signalling, since most proteins can be found in functional or regulatory complexes with other ...

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Hälla och köra ett protein Gel genom att återanvända Commercial Kassetter

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolismväg Bekräftelse och upptäckt genom 13 C-märkning av proteinogena aminosyror

Microbes have complex metabolic pathways that can be investigated using biochemistry and functional genomics methods. One important technique to examine ...

Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments

Agarosgelelektroföres för separation av DNA-fragment

Agarose gel electrophoresis is the most effective way of separating DNA fragments of varying sizes ranging from 100 bp to 25 kb1. Agarose is isolated from ...

Preparation of DNA-crosslinked Polyacrylamide Hydrogels

Framställning av DNA-tvärbundet Polyacrylamide Hydrogeler

Mechanobiology is an emerging scientific area that addresses the critical role of physical cues in directing cell morphology and function. For example, ...