Name: isolation of mouse peritoneal cavity cells
Uploaded: 2010-01-28T16:45:00
Duration: 4 min 32 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells at JoVE.com

وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة منح AI069358 ومؤسسة البحوث BloodCenter.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء في العملية ، في البنود التالية يجب أن يتم جمعها وإعدادها ل: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جليد </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5ml المحاقن مع إبرة 27G </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5ml المحاقن مع إبرة 25G </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الستايروفوم كتلة ودبابيس لتركيب الماوس </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدرج الذي يمكن أن توضع كتلة متزايدة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص وملقط </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة أنابيب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70 ٪ من الإيثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برنامج تلفزيوني مع 3 ٪ الجنين مصل العجل (FCS) (ما قبل المبردة ويحرص على الجليد) </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الماوس ، رش عليه مع الايثانول 70 ٪ وجبل على كتلة الستايروفوم على ظهرها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص وملقط قطع الجلد الخارجي للالصفاق وسحب بلطف مرة أخرى إلى تعريض الجلد الداخلي المبطن للتجويف البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 5 مل من الجليد الباردة PBS (FCS مع 3 ٪) في التجويف البريتوني باستخدام إبرة 27G. دفع الإبرة ببطء في الصفاق والحرص على عدم ثقب أي الأجهزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الحقن ، والتدليك بلطف البريتوني لإزاحة أي خلايا يعلق في حل برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال ابرة ز 25 ، شطبة الأعلى ، تعلق حقنة 5 مل في الصفاق وجمع السائل أثناء تحريك رأس الإبرة بلطف لتجنب انسداد من الأنسجة الدهنية أو غيرها من الأجهزة. جمع أكبر قدر ممكن من السوائل ودائع تعليق الخلية التي تم جمعها في أنابيب أبقى على الجليد بعد إزالة الإبرة من المحاقن. اختياري : كرر الخطوة 4-6 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق في الجلد الداخلي للالصفاق وبينما جعل من الجلد مع ملقط استخدام البلاستيك باستور ماصة لتجميع السائل المتبقي من التجويف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوة إذا تم الكشف عن 6 أو 7 تلوث دم مرئي ثم ينبغي أن يكون تجاهل عينة ملوثة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور تعليق الخلية التي تم جمعها في 1500 دورة في الدقيقة لمدة 8 دقائق ، وتجاهل وطاف resuspend الخلايا في وسائل الإعلام المطلوب أو برنامج تلفزيوني عن العد. </li></ol> أثار بروتوكول بديلة للحصول على thioglycollate الضامة : وتستخدم هذه الطريقة للحصول على اعلى محصول الضامة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 5 مل من 3 ٪ (W / V) بروير thioglycollate المتوسطة (7) في التجويف البريتوني كل الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار لمدة 3-5 أيام ، والشروع في الخطوة 1 أعلاه لجمع الخلايا. </li></ol> بالمقارنة مع نهج nonelicited ، يمكن جمع ما يقرب من 10 مرات أكثر الضامة. القلق الوحيد هو أن الضامة التي حصل عليها هذا الإجراء تختلف في بعض خصائصها الفسيولوجية. ممثل النتائج : من الماوس unmanipulated ، يمكن الحصول على الخلايا 5-10000000 التجويف البريتوني مع بروتوكول العزل الجيد. بين جميع الخلايا الحية ، 50-60 ٪ من خلايا B ، ~ الضامة 30 ٪ و 5-10 ٪ من خلايا تي (الشكل 1). <img src="/files/ftp_upload/1488/1488fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. النمط الظاهري من الخلايا المعزولة من التجويف البريتوني. كانت ملطخة بعد العزلة من الخلايا التجويف البريتوني أنها معادية للماوس TCRβ - FITC ، B220 - PE - تكساس أحمر ، أزرق CD11b والمحيط الهادئ ، CD23 - PE - Cy7 وCD5 APC. قطع تدفق ممثل cytometric تظهر النسب المئوية للخلايا B و T (أ) ، الضامة (ب) ، B1 و B2 الخلايا (ج) و B1a وB1b الخلايا (د).

<ol>
	<li>Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+characterization+of+murine+macrophages.">The isolation and characterization of murine macrophages.</a> Current Protocols in Immunology. , (2008).</li><li>Boes, M., Prodeus, A. P., Schmidt, T., Carroll, M. C., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+of+natural+immunoglobulin+M+in+immediate+defense+against+systemic+bacterial+infection.">A critical role of natural immunoglobulin M in immediate defense against systemic bacterial infection.</a> J. Exp. Med. 188, 2381-2386 (1998).</li><li>Mc Daniel, L. S., Benjamin, W. H., Forman, C., Briles, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+clearance+by+anti-phosphocholine+antibodies+as+a+mechanism+of+protection+in+experimental+pneumococcal+bacteremia.">Blood clearance by anti-phosphocholine antibodies as a mechanism of protection in experimental pneumococcal bacteremia.</a> J. Immunol. 133, 3308-3312 (1984).</li><li>Paciorkowski, N., Porte, P., Shultz, L. D., Rajan, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B1+B+lymphocytes+play+a+critical+role+in+host+protection+against+lymphatic+filarial+parasites.">B1 B lymphocytes play a critical role in host protection against lymphatic filarial parasites.</a> J. Exp. Med. 191, 731-736 (2000).</li><li>Mercolino, T. J., Arnold, L. W., Hawkins, L. A., Haughton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+mouse+peritoneum+contains+a+large+population+of+Ly-1++(CD5)+B+cells+that+recognize+phosphatidyl+choline:+relationship+to+cells+that+secrete+hemolytic+antibody+specific+for+autologous+erythrocytes.">Normal mouse peritoneum contains a large population of Ly-1+ (CD5) B cells that recognize phosphatidyl choline: relationship to cells that secrete hemolytic antibody specific for autologous erythrocytes.</a> J. Exp. Med. 168, 687-698 (1988).</li><li>O'Garra, A., Chang, R., Go, N., Hastings, R., Haughton, G., Howard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ly-1+B+(B-1)+cells+are+the+main+source+of+B+cell+derived+interleukin+10.">Ly-1 B (B-1) cells are the main source of B cell derived interleukin 10.</a> Eur. J. Immunol. 22, 711-717 (1992).</li><li>Hoover, D. L., Nacy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+activation+to+kill+Leishmania+tropica:+Defective+intracellular+killing+of+amastigotes+by+macrophages+elicited+with+sterile+inflammatory+agents.">Macrophage activation to kill Leishmania tropica: Defective intracellular killing of amastigotes by macrophages elicited with sterile inflammatory agents.</a> J. Immunol. 132, 1487-1491 (1984).</li><li>Austin, P. E., McCulloch, E. A., Till, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+factor+in+L-cell+conditioned+medium+capable+of+stimulating+colony+formation+by+mouse+marrow+cells+in+culture.">Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture.</a> J. Cell Physiol. 77, 121-134 (1971).</li><li>Stanley, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+macrophage+colony-stimulating+factor,+CSF-1.">The macrophage colony-stimulating factor, CSF-1.</a> Methods Enzymol. 116, 564-587 (1985).</li><li>Baumgarth, N., Chen, J., Herman, O. C., Jager, G. C., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+B-1+and+B-2+cells+in+immune+protection+from+influenza+virus+infection.">The role of B-1 and B-2 cells in immune protection from influenza virus infection.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 252, 163-169 (2000).</li><li>Baumgarth, N., Herman, O. C., Jager, G. C., Brown, L. E., Herzenberg, L. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B-1+and+B-2+cell-derived+immunoglobulin+M+antibodies+are+nonredundant+components+of+the+protective+response+to+influenza+virus+infection.">B-1 and B-2 cell-derived immunoglobulin M antibodies are nonredundant components of the protective response to influenza virus infection.</a> J. Exp. Med. 192, 271-280 (2000).</li><li>Berland, R., Wortis, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+functions+of+B-1+cells+with+notes+on+the+role+of+CD5.">Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 253-300 (2002).</li></ol>

عزل خلايا التجويف البريتوني هو تقنية هامة لدراسة الخلايا المناعية المختلفة ، الضامة في المقام الأول ومجموعات فرعية محددة الخلية باء. على الرغم من أن هذه عملية بسيطة ، وهناك بعض الخطوات الحاسمة المعنية. وينبغي تجنب وجود تلوث الدم في العينة التي تم جمعها للحصول على خلايا نقي التجويف البريتوني السكان. وينبغي أن يتم عن طريق القتل الرحيم خلع عنق الرحم بعناية لتجنب تلوث الدم في التجويف البريتوني. بدلا من ذلك يمكن استخدام ثاني أكسيد الكربون 2. بالإضافة إلى ذلك ، ينبغي خلال الرعاية الإجراء المناسب الواجب اتخاذها لتجنب ثقب في المثانة أو أي أجهزة أخرى في التجويف البريتوني. يتعافى معظم حقن السائل المهم أيضا أن العائد الخلية. ويستخدم على نطاق واسع هذا الإجراء لدراسة البيولوجيا بلعم منذ أعداد متوسطة من المقيمين ، ويمكن بسهولة الضامة unstimulated يمكن الحصول عليها من التجويف البريتوني ، خلافا لمهمة شاقة للتمييز الخلايا الاصلية في النخاعي الضامة ناضجة في المختبر ، وذلك باستخدام عامل تحفيز مستعمرة البلاعم (8 ، 9). ويمكن تحسين العائد بلعم من التجويف البريتوني باستخدام أسلوب الاستنباط thioglycollate ، على الرغم من استخدام thioglycollate قد يغير الخصائص الفيزيولوجية للالضامة (7). خلايا B هي جزء مهم من نظام المناعة لدينا تلعب أدوارا حاسمة في كل من الحصانة الفطرية والتكيفية. بين مختلف المجموعات السكانية الفرعية الخلية B ، B1 خلايا تضم ​​مجموعة فرعية فريدة من الخلايا باء المشاركة في الحصانة الفطرية ، والمناعة الذاتية وتنظيم المناعة. وتقع في المقام الأول خلايا B1 في التجويف البريتوني وتجديد الذات. فهي واحدة من المنتجين الأساسي للالغلوبولين المناعي الطبيعي الذي يوفر الخط الأول للحماية ضد عدد من الفيروسات والبكتيريا (10-12). الخلايا B1 هي أيضا مصدرا رئيسيا للIL - 10 (6) ، وهو خلوى هامة تشارك في تنظيم المناعة. وإن كانت قد اتبعت العديد من الدراسات مع الخلايا B1 ، لا يزال هناك مجال لمزيد من التقييم لمهامهم المتناقضة ، وخاصة دورها التنظيمي. البريتوني العزلة تجويف الخلية الأسلوب يوفر فرصة فريدة لدراسة وظائف الخلايا B1.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Thioglycollate Medium, Brewer Modified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD BBL</td>
<td>211716</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of mouse peritoneal cavity cells

التجويف البريتوني هو غشاء التجويف محدد والسوائل تملأ البطن من الثدييات ، والذي يحتوي على الكبد والطحال ومعظم القناة الهضمية والأحشاء الأخرى. انها تؤوي عددا من الخلايا المناعية بما الضامة ، وخلايا B وخلايا T. وجود عدد كبير من السذاجة الضامة في التجويف البريتوني يجعله الموقع المفضل لجمع المقيم الأنسجة الضامة ساذجة (1). التجويف البريتوني مهم أيضا لدراسة الخلايا البائية بسبب وجود التجويف البريتوني فريدة المقيمة B فرعية الخلية المعروفة باسم خلايا B1 بالإضافة إلى الخلايا B2 التقليدية. وتنقسم الخلايا الى خلايا B1 B1a B1b والتي يمكن تمييزها عن طريق التعبير سطح CD11b وCD5. B1 الخلايا تشكل مصدرا هاما من الغلوبولين المناعي الطبيعي في وقت مبكر وتوفير الحماية من مجموعة متنوعة من العوامل الممرضة (2-4). هذه الخلايا هي autoreactive في الطبيعة (5) ، ولكن لا تزال كيفية السيطرة عليها لمنع المناعة الذاتية غير مفهومة تماما. على العكس من ذلك ، CD5<sup&gt; +</sup&gt; خلايا B1a تمتلك بعض الخصائص التنظيمية بحكم القدرة IL - 10 من إنتاج (6). لذلك ، البريتوني الخلايا B1 تجويف الخلية هي مثيرة للاهتمام السكان لدراسة بسبب وظيفتها المتنوعة والتي لم تعالج العديد من المسائل المرتبطة بالتنمية والتنظيم. عزل الخلايا المناعية التجويف البريتوني المقيم هو صعب بسبب عدم وجود بنية المعرفة داخل التجويف البريتوني. سيكون لدينا بروتوكول وصف إجراءات الحصول على الخلايا المناعية قابلة للتنفيذ من التجويف البريتوني من الفئران ، والتي يمكن استخدامها بعد ذلك لتحليل التدفق الخلوي بواسطة المظهري لمختلف المقايسات والبيوكيميائية والمناعية.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells at JoVE.com

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

التجويف البريتوني في الثدييات يحتوي على مجموعات سكانية مختلفة عن الخلايا المناعية حاسمة الاستجابات المناعية الفطرية. مطلوب وسيلة فعالة لعزلة التحليلات الكيميائية الحيوية والوظيفية لهذه الخلايا. هنا نقدم وسيلة شاملة لعزل الخلايا التجويف البريتوني في الماوس.

عزل خلايا فأر التجويف البريتوني

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

عزل خلايا المناعة وظيفية القلب

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

عزل خلايا الرئة ماوس شجيرى

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

عزل وتوصيف الخلايا الجذعية والضامة من الأمعاء ماوس

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa

عزل الخلايا اللمفاوية من المسالك التناسلية الماوس الغشاء المخاطي

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and ...

Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

العزلة من الأنسجة الدهنية خلايا المناعة

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

عزل الفئران البريتوني الضامة لتنفيذ جين تحليل التعبير عند تول مثل مستقبلات تحفيز

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation of Sertoli Cells and Peritubular Cells from Rat Testes

عزل خلايا سيرتولي وPeritubular الخلايا من الفئران الخصية

The testis, and in particular the male gamete, challenges the immune system in a unique way because differentiated sperm first appear at the time of ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation, Fixation, and Immunofluorescence Imaging of Mouse Adrenal Glands

العزلة، وتثبيت، وتصوير الفلورة الغدد الكظرية الماوس

Immunofluorescence is a well-established technique for detection of antigens in tissues with the employment of fluorochrome-conjugated antibodies and has ...

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

استخدام تعزيز الفلورية الخضراء البروتين-الإعراب عن الإشريكيّة القولونية لتقييم البلعمه بلعم البريتوني الماوس

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...