Name: lentivirus production
Uploaded: 2009-10-02T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> ساندلر الربو مركز البحوث الأساسية (SABRE) <br /> مؤسسة ساندلر </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> الجزء 1 : ترنسفكأيشن من الخلايا لإنتاج 293 كلوة الجنين البشري Lentiviruses </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> * قبل 24 ساعة ترنسفكأيشن ، لوحة الخلايا 2.5 X <sup>6</sup> 10 في صحن 10cm عن confluency من 50-70 ٪ في اليوم التالي. </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يبدأ هذا البروتوكول...

<ol>
	<li>Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+concentration+of+pseudotyped+HIV-1-based+gene+transfer+vectors..">Production and concentration of pseudotyped HIV-1-based gene transfer vectors..</a> <em style='font-style: italic'>Gene Therapy</em>. , 72-7211 (2000).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., Mandel, R. J., Nguyen, M., Trono, D., Naldini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>J Virol</em>. <b>72</b> (11), 8463-8471 (1998).</li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM  HEK 293T cells Penicillin-streptomycin Glutamine Phosphate-buffered saline FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FuGENE 6 transfection reagent pSico mCherry  pMDL pRSV pVSVG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bleach</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clorox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-cm cell culture dishes 96 well cell culture dishes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multichannel pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filtered pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes Syringe Syinge filter (0.45-&mu;m)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultracentrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture incubator at 5% CO<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman SW41T.I rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FACS Array</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

lentivirus production

<p class="jove_content">تدخل الحمض النووي الريبي (رني) هو نظام لإسكات الجينات في الخلايا الحية. في رني ، في تسلسل الجينات مثلي قصيرة الرناوات التدخل (سيرنا) يتم إسكاتها في دولة ما بعد النسخي. ويمكن التعبير عن الرناوات دبوس الشعر القصير ، والسلائف لسيرنا ، وذلك باستخدام الفيروسة البطيئة ، مما يسمح لرني في مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا. Lentiviruses ، مثل فيروس نقص المناعة البشرية ، قادرة على اصابة كل من الانقسام وعدم تقسيم خلايا. سنقوم بشرح الإجراء الذي lentiviruses إلى الحزمة. التغليف يشير إلى إعداد الأكفاء من نواقل فيروس الحمض النووي. وتستند نظم الإنتاج Lentiviral ناقلات على نظام &quot;تقسيم&quot; ، حيث تم تقسيم الجينوم الفيروسي في البنى الطبيعية المساعد الفردية البلازميد. تقسيم هذه العناصر الفيروسية المختلفة إلى أربع ناقلات منفصلة يقلل من خطر خلق الفيروس قادر على تكرار إعادة التركيب من قبل العارض للجينوم lentiviral. هنا ، transfected عابر متجه تحتوي على shRNA من الاهتمام والتعبئة والتغليف ناقلات الثلاث (ف VSVG ، pRSV ، pMDL) في خلايا الإنسان 293. على الأقل بعد فترة حضانة لمدة 48 ساعة ، هو حصاد طاف الفيروس التي تحتوي على ومركزة. أخيرا ، يتم تحديد عيار الفيروس بواسطة مراسل (الفلورية) التعبير مع تدفق عداد الكريات.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

Lentivirus Production

<p class="jove_content">لجعل lentiviruses ، هي ناقلات transfected الحمض النووي في الخلايا البشرية 293. بعد الحصاد ، وتركيز طاف ، يتم تحديد عيار الفيروس عن طريق التعبير مضان مع تدفق عداد الكريات.</p>

الفيروسة البطيئة الإنتاج

RNA interference (RNAi) is a system of gene silencing in living cells. In RNAi, genes homologous in sequence to short interfering RNAs (siRNA) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Technical Demonstration of Whole Genome Array Comparative Genomic Hybridization

تظاهرة فنية من الجامعة التهجين الجينومي المقارن صفيف الجينوم

Array comparative genomic hybridization (array CGH) is a method for detecting gains and losses of DNA segments or gene dosage in the genome 1.  Recent ...

Large Insert Environmental Genomic Library Production

مكتبة كبيرة إدراج الجينوم البيئية الإنتاج

The vast majority of microbes in nature currently remain inaccessible to traditional cultivation methods. Over the past decade, culture-independent ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

تعيين جيل من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة عن طريق إعادة برمجة الخلايا الليفية الإنسان مع الإنسان الفيروسة البطيئة TF Stemgent

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

بروتوكول لإنتاج Tetramer KLRG1

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

استخراج الحمض النووي من مادة البارافين جزءا لا يتجزأ من التحليلات الجينية واللا جيني

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Transduction of Human Cells with Polymer-complexed Ecotropic Lentivirus for Enhanced Biosafety

تنبيغ من خلايا الإنسان مع البوليمر المعقد Ecotropic الفيروسة البطيئة للسلامة الأحيائية المحسن

Stem and tumor cell biology studies often require viral transduction of human cells with known or suspected oncogenes, raising major safety issues for ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

على البروتين MultiBac مجمع منصة الإنتاج في EMBL

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

الأخضر الفلورسنت القائم على البروتين التعبير فحص غشاء البروتينات في<em&gt; الإشريكية القولونية</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Production of Double-stranded DNA Ministrings

إنتاج المزدوج تقطعت بهم السبل الحمض النووي Ministrings

We constructed linear covalently closed (LCC) DNA minivectors as a non-viral gene-delivery vector alternative produced via a simple platform in vivo. DNA ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

الأمثل الفيروسة البطيئة إنتاج وزراعة الخلايا الشروط الضرورية لبنجاح خلايا تنبيغ الإنسان الشعبي الأساسي طلائي

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...