Name: lentivirus production
Uploaded: 2009-10-02T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> סנדלר אסטמה בסיסי Research Center (סיף) <br /> קרן סנדלר </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק 1: transfection של HEK 293 תאים כדי לייצר Lentiviruses </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> * 24 שעות לפני, transfection צלחת 2.5 X 10 <sup>6</sup> תאים צלחת 10 ס&quot;מ עבור confluency של 50-70% למחרת. </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל בפרוטוקול זה על ידי הכנת ה-DNA עם איזה מהם יהיה מאוחר tra...

<ol>
	<li>Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+concentration+of+pseudotyped+HIV-1-based+gene+transfer+vectors..">Production and concentration of pseudotyped HIV-1-based gene transfer vectors..</a> <em style='font-style: italic'>Gene Therapy</em>. , 72-7211 (2000).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., Mandel, R. J., Nguyen, M., Trono, D., Naldini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>J Virol</em>. <b>72</b> (11), 8463-8471 (1998).</li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM  HEK 293T cells Penicillin-streptomycin Glutamine Phosphate-buffered saline FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FuGENE 6 transfection reagent pSico mCherry  pMDL pRSV pVSVG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bleach</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clorox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-cm cell culture dishes 96 well cell culture dishes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multichannel pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filtered pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes Syringe Syinge filter (0.45-&mu;m)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultracentrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture incubator at 5% CO<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman SW41T.I rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FACS Array</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

lentivirus production

<p class="jove_content">התערבות RNA (RNAi) היא מערכת של להשתקת גנים בתאים חיים. ב RNAi, גנים הומולוגיים ברצף RNAs התערבות קצרות (siRNA) מושתקים במצב שלאחר תעתיק. RNAs מכבנה קצר, מקדימים siRNA, ניתן לבטא באמצעות lentivirus, המאפשר RNAi במגוון רחב של סוגי תאים. Lentiviruses, כגון וירוס הכשל החיסוני האנושי, הם מסוגלים להדביק גם חלוקת ולא חלוקת התאים. נתאר תהליך אשר עד lentiviruses החבילה. אריזות מתייחס הכנת וירוס המוסמכת וקטורים מ-DNA. Lentiviral ייצור מערכות וקטור מבוססים על מערכת &quot;פיצול&quot;, כאשר הגנום הנגיפי טבעי כבר התפצלה בונה עוזר אישי פלסמיד. זה פיצול של אלמנטים ויראליים שונים לארבע וקטורים נפרד מפחית את הסיכון של יצירת שכפול נגיף המסוגל ידי רקומבינציה adventitious של הגנום lentiviral. כאן, וקטור המכיל את shRNA עניין ושלושה וקטורים אריזה (p-VSVG, pRSV, pMDL) הם transfected transiently לתוך 293 תאים אנושיים. לאחר תקופה לפחות 48 שעות דגירה, supernatant וירוס המכיל נאסף ומרוכז. לבסוף, titer וירוס נקבעת על ידי הכתב (ניאון) הביטוי cytometer זרימה.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

Lentivirus Production

<p class="jove_content">כדי להפוך את lentiviruses, וקטורים DNA הם transfected 293 לתוך תאים אנושיים. לאחר הקציר ריכוז supernatant, titer וירוס נקבעת על ידי ביטוי פלואורסצנציה עם cytometer זרימה.</p>

Lentivirus הפקה

RNA interference (RNAi) is a system of gene silencing in living cells. In RNAi, genes homologous in sequence to short interfering RNAs (siRNA) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Technical Demonstration of Whole Genome Array Comparative Genomic Hybridization

הפגנה טכנית של הכלאה שלמות מערך הגנום הגנום השוואתי

Array comparative genomic hybridization (array CGH) is a method for detecting gains and losses of DNA segments or gene dosage in the genome 1.  Recent ...

Large Insert Environmental Genomic Library Production

הכנס גדול הסביבה הגנום ספריית הפקה

The vast majority of microbes in nature currently remain inaccessible to traditional cultivation methods. Over the past decade, culture-independent ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

הדור של גזע תאים מושרה pluripotent על ידי תכנות מחדש Fibroblasts האדם עם Lentivirus Stemgent TF האדם הגדר

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

פרוטוקול לייצור KLRG1 Tetramer

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

הפקת DNA מחומר פרפין Embedded עבור ניתוח גנטי epigenetic

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Transduction of Human Cells with Polymer-complexed Ecotropic Lentivirus for Enhanced Biosafety

התמרה של תאים אנושיים עם Lentivirus פולימר-ומורכבת Ecotropic עבור Enhanced biosafety

Stem and tumor cell biology studies often require viral transduction of human cells with known or suspected oncogenes, raising major safety issues for ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

פלטפורמת הפקת MultiBac החלבון המורכבת בEMBL

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

הקרנה ירוקה פלורסנט מבוסס חלבון ביטוי של החלבונים ממברנה ב<em&gt; Coli Escherichia</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Production of Double-stranded DNA Ministrings

הפקה של DNA פעמיים תקועים Ministrings

We constructed linear covalently closed (LCC) DNA minivectors as a non-viral gene-delivery vector alternative produced via a simple platform in vivo. DNA ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

אופטימלית Lentivirus ייצור תרבית תאי תנאים הכרחיים בהצלחת transduce האדם הראשי תאי אפיתל סימפונות

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...