Name: lentivirus production
Uploaded: 2009-10-02T21:00:00
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<p class="jove_content"> सैंडलर अस्थमा बेसिक रिसर्च सेंटर (सब्रे) <br /> सैंडलर फाउंडेशन </p>

<p class="jove_title"> भाग 1: HEK 293 कक्ष के अभिकर्मक Lentiviruses निर्माण </p><p class="jove_content"> * 24 घंटे पहले अभिकर्मक, 2.5 प्लेट 10 एक्स 50-70% अगले दिन के एक confluency के लिए एक 10cm पकवान <sup>में</sup> 6 कोशिकाओं . </p><ol><li> डीएनए के साथ जो एक बाद एक वायरस बनाने कोशिकाओं transfect की त...

<ol>
	<li>Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+concentration+of+pseudotyped+HIV-1-based+gene+transfer+vectors..">Production and concentration of pseudotyped HIV-1-based gene transfer vectors..</a> <em style='font-style: italic'>Gene Therapy</em>. , 72-7211 (2000).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., Mandel, R. J., Nguyen, M., Trono, D., Naldini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>J Virol</em>. <b>72</b> (11), 8463-8471 (1998).</li></ol>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM  HEK 293T cells Penicillin-streptomycin Glutamine Phosphate-buffered saline FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FuGENE 6 transfection reagent pSico mCherry  pMDL pRSV pVSVG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bleach</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clorox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-cm cell culture dishes 96 well cell culture dishes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multichannel pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filtered pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes Syringe Syinge filter (0.45-&mu;m)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultracentrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture incubator at 5% CO<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman SW41T.I rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FACS Array</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

lentivirus production

<p class="jove_content">शाही सेना हस्तक्षेप (आरएनएआई) जीवित कोशिकाओं में जीन मुंह बंद करने की एक प्रणाली है. आरएनएआई में, जीन मुताबिक़ कम दखल RNAs के अनुक्रम में (siRNA) के बाद transcriptional राज्य में खामोश हैं. लघु बाल के लिये कांटा RNAs, siRNA के लिए व्यापारियों, lentivirus का उपयोग करते हुए, सेल प्रकार की एक किस्म में आरएनएआई के लिए अनुमति देता है व्यक्त किया जा सकता है. मानव इम्यूनो वायरस जैसे Lentiviruses, दोनों विभाजन और गैर विभाजित कोशिकाओं को संक्रमित करने के लिए सक्षम हैं. हम एक प्रक्रिया है जो पैकेज lentiviruses का वर्णन करेंगे. पैकेजिंग डीएनए वैक्टर से सक्षम वायरस की तैयारी करने के लिए संदर्भित करता है. Lentiviral वेक्टर उत्पादन प्रणालियों एक &#39;विभाजन&#39; प्रणाली है, जहां प्राकृतिक वायरल जीनोम व्यक्तिगत सहायक प्लाज्मिड constructs में विभाजित किया गया है पर आधारित हैं. चार अलग वैक्टर में विभिन्न वायरल तत्वों की इस बंटवारे lentiviral जीनोम के आकस्मिक पुनर्संयोजन द्वारा एक प्रतिकृति - सक्षम वायरस बनाने का जोखिम कम हो. यहाँ, एक ब्याज और तीन पैकेजिंग वैक्टर shRNA (पी VSVG, pRSV, pMDL) युक्त वेक्टर transiently मानव 293 कोशिकाओं में ट्रांसफ़ेक्ट हैं. कम से कम एक ऊष्मायन 48 घंटे की अवधि के बाद, वायरस युक्त सतह पर तैरनेवाला काटा है और ध्यान केंद्रित किया. अंत में, वायरस टिटर रिपोर्टर (फ्लोरोसेंट) एक प्रवाह cytometer के साथ अभिव्यक्ति के द्वारा निर्धारित किया जाता है.</p>

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Lentivirus Production

<p class="jove_content">Lentiviruses बनाने के लिए, मानव 293 कोशिकाओं में डीएनए वैक्टर ट्रांसफ़ेक्ट हैं. फसल के बाद और ध्यान केंद्रित सतह पर तैरनेवाला, वायरस टिटर एक प्रवाह cytometer के साथ प्रतिदीप्ति अभिव्यक्ति द्वारा निर्धारित किया जाता है.</p>

Lentivirus उत्पादन

RNA interference (RNAi) is a system of gene silencing in living cells. In RNAi, genes homologous in sequence to short interfering RNAs (siRNA) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Technical Demonstration of Whole Genome Array Comparative Genomic Hybridization

पूरे जीनोम सरणी तुलनात्मक जीनोमिक संकरण के तकनीकी प्रदर्शन

Array comparative genomic hybridization (array CGH) is a method for detecting gains and losses of DNA segments or gene dosage in the genome 1.  Recent ...

Large Insert Environmental Genomic Library Production

बड़े सम्मिलित पर्यावरण जीनोमिक पुस्तकालय उत्पादन

The vast majority of microbes in nature currently remain inaccessible to traditional cultivation methods. Over the past decade, culture-independent ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Stemgent मानव TF lentivirus के साथ मानव Fibroblasts Reprogramming प्रेरित pluripotent स्टेम सेल की पीढ़ी सेट

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

KLRG1 tetramer के उत्पादन के लिए एक प्रोटोकॉल

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

जेनेटिक और Epigenetic विश्लेषण के लिए आयल एंबेडेड सामग्री से डीएनए निष्कर्षण

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Transduction of Human Cells with Polymer-complexed Ecotropic Lentivirus for Enhanced Biosafety

बढ़ी जैवसुरक्षा के लिए पॉलिमर complexed Ecotropic lentivirus के साथ मानव कोशिकाओं के पारगमन

Stem and tumor cell biology studies often require viral transduction of human cells with known or suspected oncogenes, raising major safety issues for ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

EMBL में MultiBac प्रोटीन परिसर उत्पादन प्लेटफार्म

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

झिल्ली प्रोटीन की हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन आधारित अभिव्यक्ति स्क्रीनिंग में<em&gt; Escherichia कोलाई</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Production of Double-stranded DNA Ministrings

डबल असहाय डीएनए Ministrings का उत्पादन

We constructed linear covalently closed (LCC) DNA minivectors as a non-viral gene-delivery vector alternative produced via a simple platform in vivo. DNA ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

इष्टतम Lentivirus उत्पादन और सेल संस्कृति शर्तों के लिए आवश्यक सफलतापूर्वक transduce प्राथमिक मानव ब्रोन्कियल उपकला कोशिकाओं

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...