Name: lentivirus production
Uploaded: 2009-10-02T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

<p class="jove_content">サンドラー喘息基礎研究センター（SABRE） <br />サンドラー財団</p>

<p class="jove_title">パート1：レンチウイルスを生成するためにHEK 293細胞のトランスフェクション</p><p class="jove_content"> * 24時間50から70パーセント翌日のコンフルエントのため10 cmディッシュにトランスフェクション、プレート2.5 × 10 <sup>6個の</sup>細胞の前に。 </p><ol><li>一つ後のウイルスを下すために、単一の細胞をトランスフェクトするとなるとDNAを調製してこのプロトコルを開始します。最初に、FuGENE 6トラン...

<ol>
	<li>Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+concentration+of+pseudotyped+HIV-1-based+gene+transfer+vectors..">Production and concentration of pseudotyped HIV-1-based gene transfer vectors..</a> <em style='font-style: italic'>Gene Therapy</em>. , 72-7211 (2000).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., Mandel, R. J., Nguyen, M., Trono, D., Naldini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>J Virol</em>. <b>72</b> (11), 8463-8471 (1998).</li></ol>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM  HEK 293T cells Penicillin-streptomycin Glutamine Phosphate-buffered saline FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FuGENE 6 transfection reagent pSico mCherry  pMDL pRSV pVSVG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bleach</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clorox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-cm cell culture dishes 96 well cell culture dishes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multichannel pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filtered pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes Syringe Syinge filter (0.45-&mu;m)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultracentrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture incubator at 5% CO<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman SW41T.I rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FACS Array</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

lentivirus production

<p class="jove_content">RNA干渉（RNAi）は、生きた細胞内の遺伝子サイレンシングのシステムです。 RNAi実験では、短い干渉RNA（siRNA）のシーケンスの相同遺伝子は、転写後の状態で沈黙している。ショートヘアピンRNA、siRNAに前駆体は、種々の細胞型におけるRNAiを可能に、レンチウイルスを用いて表現することができる。このようなヒト免疫不全ウイルスのようなレンチウイルスは、感染の両方で割ると、非分裂細胞に対応しています。我々は、レンチウイルスをパッケージ化する手順を説明します。パッケージングは​​、DNAベクターから有能なウイルスの準備を指します。レンチウイルスベクターの生産システムは、天然のウイルスゲノムは、個々のヘルパープラスミドコンストラクトに分割された&quot;分割&quot;システムに基づいています。 4つの別々のベクターに異なるウイルスの要素のこの分裂は、レンチウイルスゲノムの不定組換えによる複製が可能なウイルスを作成することのリスクを減少させる。ここでは、関心と3種類のパッケージでベクトル（P - VSVG、pRSV、PMDL）のshRNAを含むベクターを、一過性のヒト293細胞にトランスフェクトされています。少なくとも48時間のインキュベーション期間の後、ウイル​​スを含む上清を回収し、濃縮する。最後に、ウイルスの力価は、レポーター（蛍光灯）フローサイトメーターによる式によって決定されます。</p>

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Lentivirus Production

<p class="jove_content">レンチウイルスを作成するには、DNAベクターは、ヒト293細胞にトランスフェクトされています。収穫後、上清を濃縮し、ウイルス力価は、フローサイトメーターと蛍光式によって決定されます。</p>

レンチウイルスの生産

RNA interference (RNAi) is a system of gene silencing in living cells. In RNAi, genes homologous in sequence to short interfering RNAs (siRNA) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Technical Demonstration of Whole Genome Array Comparative Genomic Hybridization

全ゲノムアレイ比較ゲノムハイブリダイゼーションの技術デモンストレーション

Array comparative genomic hybridization (array CGH) is a method for detecting gains and losses of DNA segments or gene dosage in the genome 1.  Recent ...

Large Insert Environmental Genomic Library Production

大規模な挿入環境ゲノムライブラリーの製造

The vast majority of microbes in nature currently remain inaccessible to traditional cultivation methods. Over the past decade, culture-independent ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

StemgentヒトTFのレンチセットでヒト線維芽細胞を再プログラムすることによって誘導多能性幹細胞の生成

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

KLRG1テトラマーの生産のためのプロトコル

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

遺伝学的およびエピジェネティクス解析のためのパラフィン包埋材料からのDNA抽出

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Transduction of Human Cells with Polymer-complexed Ecotropic Lentivirus for Enhanced Biosafety

強化されたバイオセーフティのためのポリマー複合エコトロピックレンチウイルスによるヒト細胞のトランスダクション

Stem and tumor cell biology studies often require viral transduction of human cells with known or suspected oncogenes, raising major safety issues for ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

EMBLでMultiBacタンパク質複合体生産プラットフォーム

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

膜タンパク質の緑色蛍光タンパク質ベースの発現スクリーニングで<em&gt;エシェリヒア·コリ</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Production of Double-stranded DNA Ministrings

二本鎖DNA Ministringsの生産

We constructed linear covalently closed (LCC) DNA minivectors as a non-viral gene-delivery vector alternative produced via a simple platform in vivo. DNA ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

正常に伝達する初代ヒト気管支上皮細胞に必要な最適なレンチウイルスの生産および細胞培養条件

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...