Name: lentivirus production
Uploaded: 2009-10-02T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

<p class="jove_content"> Сандлер Астма фундаментальных исследований Центра (SABRE) <br /> Сандлер фонда </p>

<p class="jove_title"> Часть 1: Трансфекция HEK 293 клеток продуцировать лентивирусов </p><p class="jove_content"> * 24 часов до трансфекции, пластины 2,5 • 10 <sup>6</sup> клеток в 10 см блюдо для слияния 50-70% на следующий день. </p><ol><li> Начало этому протоколу, подготовив ДНК, с которой позже один трансфекции клетки, чтобы сделать вирус. Во-...

<ol>
	<li>Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+concentration+of+pseudotyped+HIV-1-based+gene+transfer+vectors..">Production and concentration of pseudotyped HIV-1-based gene transfer vectors..</a> <em style='font-style: italic'>Gene Therapy</em>. , 72-7211 (2000).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., Mandel, R. J., Nguyen, M., Trono, D., Naldini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>J Virol</em>. <b>72</b> (11), 8463-8471 (1998).</li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM  HEK 293T cells Penicillin-streptomycin Glutamine Phosphate-buffered saline FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FuGENE 6 transfection reagent pSico mCherry  pMDL pRSV pVSVG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bleach</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clorox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-cm cell culture dishes 96 well cell culture dishes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>353003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multichannel pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filtered pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes Syringe Syinge filter (0.45-&mu;m)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultracentrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture incubator at 5% CO<sub>2</sub></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman SW41T.I rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Beckman ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coulter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FACS Array</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

lentivirus production

<p class="jove_content">РНК-интерференция (RNAi) представляет собой систему генов в живых клетках. В RNAi, гены гомологичные последовательности на короткий вмешательства РНК (миРНК) заставляют молчать в посттранскрипционных государства. Короткие РНК шпилька, предшественники миРНК, могут быть выражены с помощью лентивирус, что позволяет RNAi в различные типы клеток. Лентивирусов, такие как вирус иммунодефицита человека, способны заражать обе деления и не делящихся клеток. Опишем процедуру, которая для упаковки лентивирусов. Упаковка относится к подготовке компетентных вирус из ДНК векторы. Лентивирусов производственных систем вектора основаны на &quot;разбить&quot; система, где естественный вирусный геном был разделен на отдельные вспомогательные плазмиды конструкций. Это расщепление различных вирусных элементов на четыре отдельных векторов уменьшает риск создания репликации вируса, способного придаточных рекомбинации лентивирусов генома. Здесь вектор, содержащий shRNA интересов и три вектора упаковки (р-VSVG, pRSV, pMDL) являются временно трансфекции в человеческий 293 клеток. После по меньшей мере 48-часовой инкубации вируса содержащих супернатант собирают и концентрируют. Наконец, титра вируса определяется репортера (флуоресцентные) выражение потока цитометр.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Lentivirus Production at JoVE.com

Lentivirus Production

<p class="jove_content">Для того, чтобы лентивирусов, ДНК векторы трансфекции в человеческий 293 клеток. После сбора урожая и обогатительное супернатант, титра вируса определяется флуоресценции выражение потока цитометр.</p>

Производство лентивирус

RNA interference (RNAi) is a system of gene silencing in living cells. In RNAi, genes homologous in sequence to short interfering RNAs (siRNA) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Technical Demonstration of Whole Genome Array Comparative Genomic Hybridization

Техническая демонстрация полного генома массива Сравнительный геномной гибридизации

Array comparative genomic hybridization (array CGH) is a method for detecting gains and losses of DNA segments or gene dosage in the genome 1.  Recent ...

Large Insert Environmental Genomic Library Production

Большой Вставить экологического производства геномной библиотеки

The vast majority of microbes in nature currently remain inaccessible to traditional cultivation methods. Over the past decade, culture-independent ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Генерация индуцированные плюрипотентные стволовые клетки путем перепрограммирования человеческих фибробластов с Stemgent правам лентивирус TF Установить

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

Протокол Производство KLRG1 тетрамер

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

Экстракции ДНК из парафин материала для генетических и эпигенетических Анализы

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Transduction of Human Cells with Polymer-complexed Ecotropic Lentivirus for Enhanced Biosafety

Трансдукция клеток человека с Полимер-комплекс Ecotropic лентивирус для работы с улучшенными биобезопасности

Stem and tumor cell biology studies often require viral transduction of human cells with known or suspected oncogenes, raising major safety issues for ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

MultiBac белкового комплекса добывающей платформы на EMBL

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Зеленый флуоресцентный белок на основе Expression Скрининг мембранных белков в<em&gt; Кишечная палочка</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Production of Double-stranded DNA Ministrings

Производство двухцепочечной ДНК Ministrings

We constructed linear covalently closed (LCC) DNA minivectors as a non-viral gene-delivery vector alternative produced via a simple platform in vivo. DNA ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

Оптимальное Лентивирус производства и клеточной культуры условия, необходимые для успешного трансдукции Первичные человеческие бронхиальные эпителиальные клетки

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...