Name: in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism
Uploaded: 2009-08-27T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism at JoVE.com

Wij danken Anthony J. Koleske, PhD voor het verstrekken van YFP muizen.

Deel 1: microprisma Optiek en Microscoop Setup <ol><li> De microprisma die we gebruiken zijn 1-mm, rechts-angle prisma&#39;s gemaakt van BK7 glas gekocht bij de Optosigma Corporation (figuur 1). Microprisma worden afgehandeld met behulp van een tang waar mogelijk. </li><li> De schuine zijde van de microprisma is bedekt met verbeterde zilver tot een reflectie van meer dan 97% leveren 400 tot 2000 nm. Dit zorgt voor interne reflectie van zowel de laser-excitatie licht en de uitgezonden fluorescentie. </li><li> Micropris...

<ol>
	<li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).</li><li>Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuations+and+stimulus-induced+changes+in+blood+flow+observed+in+individual+capillaries+in+layers+2+through+4+of+rat+neocortex.">Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).</li></ol>

Met behulp van een microprisma in een imaging experiment is betrekkelijk eenvoudig en biedt vele voordelen voor in vivo studies over de neocortex. Representatieve voorbeelden met behulp van deze techniek zijn foto&#39;s genomen van transgene muizen die geel fluorescerend eiwit in laag V corticale neuronen. Met behulp van microprisma ziet men een verzameling van grote piramidale cellichamen in laag V, bijna 1 mm onder het corticale oppervlak. Ook gezien zijn de apicale dendrieten, dat door alle oppervlakkige lagen verlen...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA)</td>
<td>055-0010</td>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
</tr>
<tr>
<td>Fluorescein-dextran</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>FD70</td>
<td>70 kDa </td>
</tr>
<tr>
<td>0.28 NA, 4x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>XLFLUOR 4x/340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.60 NA, 40x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>LUCPLFLN</td>
<td>With 0-2 mm coverglass correction</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism

We presenteren een protocol voor in vivo beeldvorming van corticale weefsel met behulp van een deep-brain imaging sonde in de vorm van een microprisma. Microprisma zijn 1-mm groot en hebben een reflecterende coating op de hypotenusa tot interne reflectie van de excitatie en emissie licht mogelijk te maken. De microprisma sonde tegelijkertijd beelden meerdere corticale lagen met een perspectief meestal alleen gezien in slice preparaten. Beelden worden verzameld met een groot veld-of-view (~ 900 um). Daarnaast geven we informatie over de niet-chirurgische ingreep te overleven en de microscoop setup. Representatieve resultaten bevatten afbeeldingen van laag V piramidale neuronen van Thy-1 YFP-H muizen tonen hun apicale dendrieten zich uitstrekt door de oppervlakkige corticale laag en zich uitstrekt tot in bosjes. Resolutie was voldoende om de afbeelding dendritische spines de buurt van de soma van laag V neuronen. Een staart-veneuze injectie van fluorescente kleurstof onthult de ingewikkelde netwerk van bloedvaten in de cortex. Line-scanning van de rode bloedcellen (RBC&#39;s) die door de haarvaten onthult RBC snelheid en de flux tarieven kunnen worden verkregen. Deze roman microprisma probe is een elegant, maar krachtige nieuwe manier van visualiseren van diepe cellulaire structuren en corticale functie in vivo.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism at JoVE.com

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

Haakse microprisma ingebracht in de muis neocortex maakt diepe beeldvorming van meerdere corticale lagen met een standpunt typisch gevonden in slice. One-millimeter microprisma bieden een breed veld-of-view (~ 900 um) en ruimtelijke resoluties voldoende om dendritische spines op te lossen. We demonstreren laag V neuronale beeldvorming en neocorticale vasculaire beeldvorming met behulp van microprisma.

In vivo beeldvorming van Deep Corticale lagen met behulp van een microprisma

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Voorbereiden E18 Corticale Rat Neuronen voor Compartimentering in een microfluïdische apparaat

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

De voorbereiding van gescheiden Mouse Cortical Neuron culturen

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

Calcium beeldvorming van corticale neuronen met behulp van Fura-2 AM

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging van borsttumoren gebruik van IVIS Spectrum

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging eiwit-eiwit interacties In vivo</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage CoTrAC

Single-molecule Imaging van genregulatie<em&gt; In vivo</em&gt; Met behulp van Cotranslational Activering door splitsing (CoTrAC)

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

Kwantificering van eiwitexpressie en Co-localisatie behulp multiplexverzending Immuno-histochemische kleuring en multispectrale

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Hoge-resolutie time-lapse beeldvorming en geautomatiseerde analyse van de dynamiek van microtubuli in Living humane navelstreng endotheelcellen

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Meten van de stijfheid van<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mouse aorta&#39;s met behulp van Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...