Name: in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism
Uploaded: 2009-08-27T16:00:00
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Nous remercions Anthony J. Koleske, PhD pour fournir les souris YFP.

Partie 1: Optique microprismes et de configuration de microscope <ol><li> Les microprismes que nous utilisons sont de 1 mm, angle droit prismes à base de verre BK7 achetés auprès de la Société Optosigma (figure 1). Microprismes sont traitées en utilisant une pince quand c&#39;est possible. </li><li> L&#39;hypoténuse du microprismes est revêtu d&#39;argent améliorée afin de fournir une réflectivité supérieure à 97% de 400 à 2000 nm. Ceci fournit une réflexion interne à la fois la lumière d&#39;excitat...

<ol>
	<li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).</li><li>Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuations+and+stimulus-induced+changes+in+blood+flow+observed+in+individual+capillaries+in+layers+2+through+4+of+rat+neocortex.">Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).</li></ol>

Utiliser un microprisme dans une expérience d&#39;imagerie est relativement simple et offre de nombreux avantages pour les études in vivo sur le néocortex. Des exemples représentatifs en utilisant cette technique comprennent des images prises à partir des souris transgéniques exprimant une protéine fluorescente jaune dans les neurones V couche corticale. Utiliser microprismes, on peut voir une collection de grands corps des cellules pyramidales dans la couche V, près de 1 mm en dessous de la surface corticale. O...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA)</td>
<td>055-0010</td>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
</tr>
<tr>
<td>Fluorescein-dextran</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>FD70</td>
<td>70 kDa </td>
</tr>
<tr>
<td>0.28 NA, 4x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>XLFLUOR 4x/340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.60 NA, 40x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>LUCPLFLN</td>
<td>With 0-2 mm coverglass correction</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism

Nous présentons un protocole pour l&#39;imagerie in vivo du tissu cortical en utilisant une sonde d&#39;imagerie cérébrale profonde dans la forme d&#39;un microprisme. Microprismes sont de 1 mm en taille et ont un revêtement réfléchissant sur l&#39;hypoténuse pour permettre une réflexion interne de l&#39;excitation et l&#39;émission de lumière. La sonde microprismes simultanément plusieurs images couches corticales avec une perspective typiquement observée uniquement dans les préparations tranche. Les images sont recueillies avec un grand champ de vue (~ 900 um). En outre, nous fournissons des détails sur la procédure de non-chirurgical et la survie de configuration de microscope. Les résultats représentatifs comprennent des images de neurones pyramidaux couche V de Thy-1-H YFP souris montrant leurs dendrites apicales qui s&#39;étend à travers la couche superficielle du cortex et s&#39;étendant dans des touffes. Résolution a été suffisante pour épines dendritiques image proche du soma des neurones V couche. Une injection de queue veine de colorant fluorescent révèle le réseau complexe de vaisseaux sanguins dans le cortex. À balayage linéaire de globules rouges (hématies) qui coule à travers les capillaires révèle la vitesse de RBC et les taux de flux peuvent être obtenues. Cette sonde microprismes roman est un élégant mais puissant méthode nouvelle de visualiser en profondeur les structures cellulaires et la fonction corticale in vivo.

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In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

À angle droit microprismes inséré dans le néocortex de souris permet d&#39;imagerie profonde de plusieurs couches corticales avec un point de vue on trouve généralement dans les tranches. Un millimètre microprismes offrent un champ de vision large (~ 900 um) et des résolutions spatiales suffisantes pour résoudre les épines dendritiques. Nous démontrons la couche V imagerie neuronale et néocorticale imagerie vasculaire en utilisant microprismes.

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