Name: in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism
Uploaded: 2009-08-27T16:00:00
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Agradecemos a Anthony J. Koleske, PhD para fornecer os ratos YFP.

Parte 1: Optics Microprisma e Configuração do Microscópio <ol><li> O microprismas que usamos são de 1 mm, em ângulo reto prismas feitos de vidro comprado BK7 da Corporação Optosigma (Figura 1). Microprismas são tratadas usando uma pinça, sempre que possível. </li><li> A hipotenusa do microprisma é revestido com prata aperfeiçoado para fornecer uma refletividade de mais de 97% 4-200 nm. Isto proporciona reflexão interna, tanto de luz de excitação do laser e da fluorescência emitida. </li><li> Microprism...

<ol>
	<li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).</li><li>Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuations+and+stimulus-induced+changes+in+blood+flow+observed+in+individual+capillaries+in+layers+2+through+4+of+rat+neocortex.">Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).</li></ol>

Usando um microprisma em um experimento de imagens é relativamente simples e oferece muitas vantagens para os estudos in vivo sobre o neocórtex. Exemplos representativos usando esta técnica incluem imagens tiradas a partir de camundongos transgênicos expressando a proteína fluorescente nos neurônios da camada amarela V cortical. Usando microprismas pode-se ver uma coleção de grandes corpos celulares piramidais da camada V, cerca de 1 mm abaixo da superfície cortical. Visto também são os dendritos apicais que ...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA)</td>
<td>055-0010</td>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
</tr>
<tr>
<td>Fluorescein-dextran</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>FD70</td>
<td>70 kDa </td>
</tr>
<tr>
<td>0.28 NA, 4x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>XLFLUOR 4x/340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.60 NA, 40x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>LUCPLFLN</td>
<td>With 0-2 mm coverglass correction</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism

Nós apresentamos um protocolo para a imagem in vivo do tecido cortical usando uma sonda de imagem cerebral profunda na forma de um microprisma. Microprismas estão 1 mm em tamanho e têm um revestimento reflexivo sobre a hipotenusa para permitir reflexão interna de excitação e emissão de luz. A sonda microprisma simultaneamente imagens múltiplas camadas cortical com uma perspectiva tipicamente vistos apenas em preparações fatia. As imagens são coletados com um grande campo de visão (~ 900 mm). Além disso, nós fornecemos informações sobre o procedimento não-cirúrgico de sobrevivência e configuração microscópio. Resultados representativos incluem imagens de neurônios piramidais da camada V de Thy-1-H YFP camundongos mostrando suas dendrites apical estendendo-se através da camada superficial cortical e estendendo-se tufos. Resolução foi suficiente para espinhas dendríticas imagem perto do soma dos neurônios da camada V. A injeção de cauda veia de corante fluorescente revela a intrincada rede de vasos sanguíneos no córtex. Linha de varredura das células vermelhas do sangue (hemácias) que flui através dos capilares revela RBC velocidade e taxas de fluxo pode ser obtida. Esta sonda microprisma romance é um elegante, o método ainda nova e poderosa de visualizar profundas estruturas celulares e da função cortical in vivo.

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In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

Em ângulo reto microprismas inserido no neocórtex do mouse permite a imagem profunda de múltiplas camadas cortical com um ponto de vista tipicamente encontrados em fatia. Um milímetro microprismas oferecer um campo de visão ampla (~ 900 mm) e resolução espacial suficiente para resolver as espinhas dendríticas. Demonstramos camada de imagem V neuronal e de imagem vascular neocortical usando microprismas.

Em Imaging vivo do Deep camadas corticais usando um Microprisma

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

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