Name: in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism
Uploaded: 2009-08-27T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism at JoVE.com

Vi tackar Anthony J. Koleske, PhD för tillhandahållandet av YFP möss.

Del 1: mikroprisma Optik och Mikroskop Setup <ol><li> Det mikroprismor vi använder är 1-mm, rätvinklig prismor tillverkade av BK7 glas som köpts från Optosigma Corporation (Figur 1). Mikroprismor hanteras med pincetten så är möjligt. </li><li> Hypotenusan av mikroprisma är belagd med förbättrad silver för att ge en reflexion på mer än 97% från 400 till 2000 nm. Detta ger intern spegling av både laser excitation ljuset och den utsända fluorescensen. </li><li> Mikroprismor alltid hanteras med pincetten ...

<ol>
	<li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ScanImage:+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes.">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).</li><li>Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluctuations+and+stimulus-induced+changes+in+blood+flow+observed+in+individual+capillaries+in+layers+2+through+4+of+rat+neocortex.">Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).</li></ol>

Med hjälp av en mikroprisma i en avbildning experiment är relativt enkelt och erbjuder många fördelar för in vivo-studier på neocortex. Representativa exempel att använda denna teknik inkluderar bilder tagna från transgena möss som uttrycker gula fluorescerande protein i lager V kortikala neuroner. Använda mikroprismor kan man se en samling av stora pyramidformade cell organ i lager V, nästan 1 mm under kortikala ytan. Också sett är de apikala dendriter som sträcker sig genom alla de ytliga lagren innan di...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA)</td>
<td>055-0010</td>
<td>With enhanced silver reflective coating-(R77)</td>
</tr>
<tr>
<td>Fluorescein-dextran</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>FD70</td>
<td>70 kDa </td>
</tr>
<tr>
<td>0.28 NA, 4x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>XLFLUOR 4x/340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.60 NA, 40x air objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>LUCPLFLN</td>
<td>With 0-2 mm coverglass correction</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo imaging of deep cortical layers using a microprism

Vi presenterar ett protokoll för in vivo avbildning av kortikal vävnad med hjälp av en djupt hjärnröntgen sond i form av en mikroprisma. Mikroprismor är 1-mm i storlek och har en reflekterande beläggning på hypotenusan för att möjliggöra inre reflektion av excitation och utsläpp ljus. Den mikroprisma sonden samtidigt bilder multipla kortikala skikt med ett perspektiv ses vanligtvis bara i bit förberedelser. Bilderna samlas in med ett stort fält-of-view (~ 900 mikrometer). Dessutom ger vi information om icke-överlevnad kirurgiska ingrepp och mikroskop setup. Representativa resultat inkluderar bilder av lager V pyramidal nervceller från Thy-1 YFP-H möss visar deras apikala dendriter som sträcker sig genom det ytliga kortikala lager och sträcker sig in tofsar. Upplösning var tillräckligt för att ryggar bilden dendritiska nära Soma i lagret V nervceller. En svans-ven injektion av fluorescerande färg avslöjar intrikata nätverk av blodkärl i hjärnbarken. Line-scanning av röda blodkroppar (RBC) som flyter genom kapillärerna avslöjar RBC hastighet och flux priser kan erhållas. Denna roman mikroprisma sond är en elegant, men ändå kraftfull ny metod för att visualisera djup cellstrukturer och kortikala funktioner in vivo.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism at JoVE.com

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

Rätvinklig mikroprismor in i musen neocortex möjliggör djup avbildning av flera kortikala skikt med en synpunkt som normalt återfinns i slice. En millimeter mikroprismor erbjuda ett brett fält-of-view (~ 900 mikrometer) och rumslig resolutioner tillräckligt för att lösa Dendritutskotten. Vi visar skikt V neuronala bildbehandling och hjärnbarkens vaskulär avbildning med mikroprismor.

In vivo Imaging av Deep kortikala lager med en mikroprisma

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Förbereda E18 kortikala Råtta Nervceller för uppdelning i en mikroflödessystem enhet

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

Beredning av dissocierade Mouse kortikala Neuron kulturer

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

Kalcium Imaging av kortikal nervceller med Fura-2:00

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

In vivo Bioluminescent Imaging för juvertumörer Använda IVIS Spectrum

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein interaktioner In vivo</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage CoTrAC

Enda molekyl avbildning av genreglering<em&gt; In vivo</em&gt; Använda Cotranslational Aktivering genom klyvning (CoTrAC)

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

Kvantifiering av proteinuttryck och samlokalisering Använda Multiplex Immuno-histokemisk färgning och multispektrala

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Högupplöst time-lapse avbildning och automatiserad analys av mikrotubuli Dynamics i Living Human navelsträngsvenendotelceller

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...