Name: isolation and large scale expansion of adult human endothelial colony forming progenitor cells
Uploaded: 2009-10-28T07:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells at JoVE.com

Авторы благодарят доктора Катарина Schallmoser за предоставление pHPL и Маргарета Frühwirth и Даниэла Талер за отличную техническую помощь.

А.) ECFC ISOLATON ДЕНЬ 1: <ol><li> Перед тем, как начать с эксперимента подготовить среду клеточной культуры среднего роста эндотелия-2 (EGM-2). Дополнение 500мл эндотелиальной базальной среды-2 с гепарином (1 мл 1000 ЕД / мл), 5 мл 100x раствор пенициллина / стрептомицина (все Sigma, Сент-Луис, штат ?...

<ol>
	<li>Solovey, A., Lin, Y., Browne, P., Choong, S., Wayner, E., Hebbel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+activated+endothelial+cells+in+sickle+cell+anemia.">Circulating activated endothelial cells in sickle cell anemia.</a> N Engl J Med. 337, 1584-1590 (1997).</li><li>Yoder, M. C., Mead, L. E., Prater, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redefining+endothelial+progenitor+cells+via+clonal+analysis+and+hematopoietic+stem/progenitor+cell+principals.">Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals.</a> Blood. 109, 1801-1809 (2007).</li><li>Schallmoser, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+large-scale+expansion+of+functional+mesenchymal+stem+cells+from+unmanipulated+bone+marrow+without+animal+serum.">Rapid large-scale expansion of functional mesenchymal stem cells from unmanipulated bone marrow without animal serum.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14, 185-196 (2008).</li><li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+large-scale+expanded+endothelial+colony-forming+cells+function+in+vitro+and+in+vivo.">Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo.</a> Blood. , (2009).</li><li>Ricardo, R., Phelan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+and+Determining+the+Viability+of+Cultured+Cells.">Counting and Determining the Viability of Cultured Cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Эта изоляция романа и расширение метод простой и эффективный процесс, который является более эффективным и менее затратным по времени, избегая любой ячейке разделения (без градиента плотности необходимости) и дешевле, чем традиционные методы. При использовании pHPL контакт с бычьей ант?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Endothelial basal Medium-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>500ml</td>
</tr>
<tr>
<td>EGM-2 SingleQuots</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EGF, hFGF-B, VEGF, IGF-1, Hydrocortisone, ascorbic acid</td>
</tr>
<tr>
<td>preservative-free Heparin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>10U/ml per EGM-2</td>
</tr>
<tr>
<td>L-Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2mM per EGM-2</td>
</tr>
<tr>
<td>Penicillin and Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>100U/mL Penicillin and 100&mu;g/mL Streptomycin per EGM-2</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin/1mM EDTA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco Cell Culture, Invitrogen </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>7ml for T75 flask 70ml for CF-4</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Four-layered cell factory (CF-4) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Funnel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T75cm2 culture flask (with vented cap)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6 mL vacutainer tubes (preservative-free sodium heparin) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickenson</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>preloaded with 108 IU/6ml of preservative-free sodium heparin</td>
</tr>
<tr>
<td>50ml Falcon tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5ml Stripetts</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Costar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25ml Stripetts</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Costar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Squeezer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Costar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0,2 pore size sterile filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2x 500ml per EGM-2</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation and large scale expansion of adult human endothelial colony forming progenitor cells

В данной статье представлена ​​новая стратегия восстановления эндотелия колониеобразующих клеток-предшественников (ECFCs) с гепарином, но в остальном unmanipulated взрослого человека периферической крови в среднем 12 дней. После большого расширения масштабов&gt; 1x10 8 ECFCs могут быть получены для дальнейших испытаний. Преимущественно с помощью pHPL контакта клеток человека с бычьей сыворотки антигены могут быть исключены. По проточной цитометрии и иммуногистохимии изолированных клеток можно охарактеризовать как ECFC и их функциональность в пробирке для формирования сосудистого подобных структур может быть протестирована в анализе Матригель. В дальнейшем эти клетки могут быть подкожно вводили в модель мыши для формирования функциональной, перфузии судов в естественных условиях. После долгосрочного расширения и распространения криоконсервации, функции и геномной стабильности по всей видимости, сохранится. 3,4 Это животное-белковые свободной изоляции и расширения метод легко применимы для создания большого количества ECFCs.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells at JoVE.com

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (Video) | JoVE

Эндотелиальная колониеобразующих клеток-предшественников (ECFCs) являются перспективным инструментом для изучения сосудистого гомеостаза и ремонта.<sup&gt; 1,2</sup&gt; В работе вводится новый животного сыворотки метод выделения и расширения ECFC с гепарином взрослых периферической крови человека с объединенные тромбоцитов человека лизат (pHPL) уменьшение риска против бычьего иммунизации.

Выделение и расширение добычи взрослых человеческих эндотелиальных клеток, образующих колонии Прародитель

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVEC (Video) | JoVE

Выделение пупочной вены человека эндотелиальных клеток (HUVEC)

Angiogenesis is a complex multi-step process, where in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature. These steps ...

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries (Video) | JoVE

Крупномасштабная Экраны метагеномных библиотеки

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs (Video) | JoVE

Выделение и животных Сыворотка свободного расширения прав пуповины производных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) и эндотелиальных колонии Формирование клеток-предшественников (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation of Valvular Endothelial Cells

Isolation of Valvular Endothelial Cells (Video) | JoVE

Выделение клапанные эндотелиальных клеток

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system.  These thin, fibrous tissues are ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells (Video) | JoVE

Выделение и культуры Птичий Эмбриональные клетки-предшественники клапанные

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin (Video) | JoVE

Выделение и культуры взрослых Эпителиальные стволовые клетки из человеческой кожи

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors (Video) | JoVE

Количественный анализ на инсулиноподобный выражения колониеобразующих прародителей

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion

Isolation of CD133+ Liver Stem Cells for Clonal Expansion (Video) | JoVE

Выделение CD133 + печень стволовых клеток для клональной экспансии

Liver stem cell, or oval cells, proliferate during chronic liver injury, and are proposed to differentiate into both hepatocytes and cholangiocytes. In ...

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood (Video) | JoVE

Фенотипическая и функциональная характеристика эндотелиальных колониеобразующих клеток, полученных из человеческой пуповинной крови

Longstanding views of new blood vessel formation via angiogenesis, vasculogenesis, and arteriogenesis have been recently reviewed1. The presence of ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÂ¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures (Video) | JoVE

Наивные стволовых клеток взрослых Изоляция от первичных человеческих культурах фибробластов

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...