Name: isolation and purification of drosophila peripheral neurons by magnetic bead sorting
Uploaded: 2009-12-01T14:59:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting at JoVE.com

我々は、博士に感謝する。塩原-ティンニン本研究で使用されてこない系統を提供するための月とウェスGrueber。著者らはこの研究の支援（DNC）とジョージメイソン大学の学長のオフィス（EPRI）のためにトーマスF.とケイトミラーJeffressメモリアルトラストを認める。

ショウジョウバエ末梢の神経細胞の磁気ビーズソート上の一般的なコメント（議定書の完成のための総タイミング：2.5〜3時間） きれいな、RNaseフリーの環境を維持するための標準的なラボの手順は、RNA分解を防ぐために、常に観察する必要があります。 ショウジョウバエ幼虫のクチクラを切開し、細胞解離バッファーに格納されてい?...

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	<li>Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecules+and+mechanisms+of+dendrite+development+in+Drosophila.">Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila.</a> Development. 136, 1049-1061 (2009).</li><li>Parrish, J. Z., Emoto, K., Kim, ., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+that+regulate+establishment,+maintenance,+and+remodeling+of+dendritic+fields.">Mechanisms that regulate establishment, maintenance, and remodeling of dendritic fields.</a> Ann. Rev. Neurosci. 30, 399-423 (2007).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+for+studies+of+gene+function+in+neuronal+morphogenesis.">Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 22, 451-461 (1999).</li><li>Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+Drosophila+multidendritic+neurons+in+the+central+nervous+system:+links+with+peripheral+dendrite+morphology.">Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology.</a> Development. 134, 55-64 (2007).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+methods.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) methods.</a> Methods. 25, 402-408 (2001).</li></ol>

ここで紹介するプロトコールは、磁気ビーズ細胞選別の戦略を用いてショウジョウバエの三齢幼虫のクチクラの内側の表面に強固に付着末梢神経細胞の単離および精製のために最適化されています。我々は特にショウジョウバエのDAニューロンを分離するためにこのプロトコルを使用している一方で、開発の幼虫または蛹の段階で表皮に付着する他の細胞型の分離にこのプロトコル（例えば?...

機器<ul><li> （10）ネオジウムブロックマグネット（K＆J Magnetics、Inc。製、カタログ番号B444B）、代わり™-2（Invitrogen社、カタログ番号123 - 21D）を使用することができますdynamagを。 </li><li>大クリアランス乳棒付きKontesガラスティッシュグラインダー、2ミリリットルの作業能力、（カタログ番号＃885300〜0002） </li><li>セルのフィルタ、例えば、MACSプレセパレーションフィルター（ミルテニーバイオテク社、カタログ番号130-​​041-407） </li><li> 35ミリメートルペトリ皿Sylgard（ダウコーニング社、カタログ番号3097358〜1004）でコーティング</li><li>解剖ツール：デュモン5号鉗子の2ペア（ファイン科学のツール、カタログ番号11251から20。） </li><li> Vannas春顕微解剖用はさみ（ファイン科学のツール、カタログ番号15000〜08） </li><li>使い捨てチップとピペット（P - 1000、P - 100、P - 10） </li><li>細胞と見積もりの​​純度をカウントする標準血球計数器</li><li>標準直径の火ポリッシュのヒントとパスツールピペットは、標準の直径の約50％に縮小し、粉砕のための標準的な直径の約25％に縮小</li><li>テーブルトップマイクロ遠心機（1-16,000（X）g）の</li><li>渦</li><li>蛍光ステレオ顕微鏡（ライカMZ16FAはこのプロトコルで使用されていた） </li></ul>

isolation and purification of drosophila peripheral neurons by magnetic bead sorting

市販<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;末梢神経系（PNS）は、機能と分子レベルでのニューロンの発達と樹状突起の形態形成の複雑なプロセスを調査するための強力なモデルです。これらの分析を支援するために、我々は、広く樹状突起の形態形成を研究するために使用されている樹状分枝（DA）ニューロンと呼ばれるPNSニューロンのサブクラスの分離のための戦略を開発している<sup&gt; 1,2</sup&gt;。これらのニューロンは、部分的にそれらの非常に低い発生と厳しいキチン質の幼虫のクチクラ下の彼らの困難な到達位置のために、純粋な集団として分離するのは非常に困難です。新たに開発した手法は、これらの課題を克服し、抗体でコーティングされた磁気ビーズを用いて迅速かつ特異的な細胞の濃縮に基づいています。私たちの磁気ビーズソーティング研究のために、我々はマウスCD8タグ付けされたGFPの融合タンパク質を（表現する年齢をマッチさせた三齢幼虫を用いている<em&gt; UAS - mCD8 - GFP</em&gt;）<sup&gt; 3</sup&gt;クラスIVの樹状突起の分枝のどちらかの制御下にある（DA）ニューロン特異的<em&gt;スリ（PPK）- GAL4</em&gt;ドライバー<sup&gt; 4</sup&gt;またはパン- DAニューロン特異的GAL4の制御<sup&gt; 21から7</sup&gt;ドライバー<sup&gt; 5</sup&gt;。このプロトコルは、いくつかのパラメータを変化させることによって、幼虫のクチクラの内壁に付着しているPNSの細胞を単離するために最適化されているが、同じプロトコルはの幼虫or蛹の段階で表皮に接続されている多くの異なる細胞型を分離するために使用することができるGAL4固有のドライバの発現パターンに応じて幼虫の器官からの開発（例えば上皮、筋肉、oenocytesなど）、または他の細胞型。この方法により単離されたRNAは高品質のものであり、容易にこのようなマイクロアレイの遺伝子発現プロファイリング研究のような下流のゲノム解析に使用することができます。このアプローチは、分離の研究を実行する強力な新しいツールを提供しています<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;樹状分枝（DA）ニューロンは、それによって樹状突起形態形成の分子メカニズムに新たな洞察を提供しています。

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Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

このビデオ、記事では、の単離および精製のための方法を提示<em&gt;ショウジョウバエ</em高速磁気ビーズアシスト細胞選別の戦略を使用して&gt;末梢神経。単離された細胞から得られたRNAは、容易にマイクロアレイ解析などのダウンストリームアプリケーションに使用することができます。

の単離と精製ショウジョウバエ</em磁気ビーズソート別>末梢ニューロン

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

クーマシー有機溶媒および酢酸のないG - 250でゲル中のタンパク質の染色

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

不安定な多タンパク質複合体の単離で in vivoで制御セルラー架橋及び免疫磁気アフィニティークロマトグラフィー

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

の分離キイロショウジョウバエ精巣

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

キネシンの単離及び精製からショウジョウバエ胚

Motor proteins move cargos along microtubules, and transport them to specific sub-cellular locations. Because altered transport is suggested to underlie a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

RNA精製によってクロマチンの単離（チャープ）

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are the most prominent cell type within the tumor stroma of many cancers, in particular breast carcinoma, and their ...

Purification of Transcripts and Metabolites from Drosophila Heads

Purification of Transcripts and Metabolites from Drosophila Heads

転写産物および代謝物からの精製<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;ヘッド

For the last decade, we have tried to understand the molecular and cellular mechanisms of neuronal degeneration using Drosophila as a model organism. ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

培養中の細胞小器官輸送<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;細胞：S2細胞ラインと一次ニューロン。

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

中のタンパク質 - タンパク質相互作用を特定する<em&gt;ショウジョウバエ</emタンデムアフィニティー精製（TAP）による&gt;アダルトヘッド

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

組織解離と差動濾過により移植のためにミトコンドリアの迅速な単離および精製

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

の単離と精製ショウジョウバエ末梢ニューロン