Name: isolation and purification of drosophila peripheral neurons by magnetic bead sorting
Uploaded: 2009-12-01T14:59:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting at JoVE.com

Biz Dr teşekkür ederim. Yuh-Nung Jan ve Wes Grueber Bu çalışmada kullanılan uçucu stokları sağlamak için. Yazarlar Thomas F. ve bu araştırma desteği için Kate Miller Jeffress Memorial Trust (DNC) ve George Mason Üniversitesi Provost Ofisi (EPRI) kabul etmiş sayılırsınız.

Drosophila Periferik Nöronlar Manyetik Boncuk Sıralama Genel Yorumlar (Protokol tamamlanması için toplam Zamanlama: 2.5-3 saat) Temiz, RNAse ortamda sürdürülmesi için standart laboratuvar prosedürleri RNA bozulmasını önlemek için her zaman dikkat edilmelidir. Drosophila larva manikür disseke ve hücre disosiasyon tampon yerleştirilir, periferik nöronlar manikür ayırmak için son hücreleri biri. Biz bu özelliği, sömürülen ...

<ol>
	<li>Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecules+and+mechanisms+of+dendrite+development+in+Drosophila.">Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila.</a> Development. 136, 1049-1061 (2009).</li><li>Parrish, J. Z., Emoto, K., Kim, ., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+that+regulate+establishment,+maintenance,+and+remodeling+of+dendritic+fields.">Mechanisms that regulate establishment, maintenance, and remodeling of dendritic fields.</a> Ann. Rev. Neurosci. 30, 399-423 (2007).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+for+studies+of+gene+function+in+neuronal+morphogenesis.">Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 22, 451-461 (1999).</li><li>Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+Drosophila+multidendritic+neurons+in+the+central+nervous+system:+links+with+peripheral+dendrite+morphology.">Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology.</a> Development. 134, 55-64 (2007).</li><li>Song, W., Onishi, M., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+multidendritic+sensory+neurons+are+necessary+for+rhythmic+locomotion+behavior+in+Drosophila+larvae.">Peripheral multidendritic sensory neurons are necessary for rhythmic locomotion behavior in Drosophila larvae.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104, 5199-5204 (2007).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+methods.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) methods.</a> Methods. 25, 402-408 (2001).</li></ol>

Burada sunulan protokol, bir manyetik boncuk hücre sıralama stratejisi kullanarak Drosophila üçüncü instar larva manikür iç yüzeyine sıkıca yapışır periferik nöronların izolasyon ve saflaştırılması için optimize edilmiştir. Bu protokolün Drosophila da nöronların, uygulamalar, özellikle larva veya pupa aşamalarında gelişme manikür bağlı diğer hücre türleri izolasyon izole etmek için bu protokolü kullanılır olsa da (örneğin epitel, kas, diğer çevre nöronlar) tarafından adapte e...

Ekipman <ul><li> (10) alternatif ™ -2 DynaMag Neodimyum blok mıknatıslar (K &amp; J Manyetik, Inc, Kedi # B444B), (Invitrogen, Kedi # 123-21D) kullanılıyor olabilir. </li><li> Kontes büyük bir boşluk havaneli Cam Doku Öğütücü, 2 ml çalışma kapasitesi, (Kat. # 885.300-0002) </li><li> Hücre filtreler, örneğin MACS Ön-Ayırma Filtre (Miltenyi Biotec, Kedi # 130-041-407) </li><li> 35 mm petri-yemekleri Sylgard (Dow Corning Corporation, Kedi # 3.097.358-1004) ile kaplı </li><li> Diseksiyon araçları: Dumont No 5 forseps iki çift (Güzel Bilim Araçlar, Kedi # 11.251-20.) </li><li> Vannas bahar mikro diseksiyon makas (Güzel Bilimi Araçları, Kedi # 15.000-08) </li><li> Tek ipuçları Pipetler (P-1000, P-100, P-10) </li><li> Standart hemasitometre hücreleri saymak ve tahmini saflık </li><li> Standart çap yangın parlak ipuçları Pasteur pipetler, standart çap ~% 50 daralmış ve öğütme için standart çap ~% 25 daraldı </li><li> Masa üstü mikro santrifüj (1-16,000 (x) g) </li><li> Girdap </li><li> Floresan stereo-mikroskop (Leica MZ16FA bu protokolü kullanılmıştır) </li></ul>

isolation and purification of drosophila peripheral neurons by magnetic bead sorting

<em&gt; Drosophila</em&gt; Periferik sinir sistemi (PNS), fonksiyonel ve moleküler düzeyde nöronal gelişim ve dendrit morfolojilerinden karmaşık süreçleri araştırmak için güçlü bir model. Bu analizlerde yardımcı olmak için, dendritik arborization (da) dendrit morfolojilerinden çalışmak için yaygın olarak kullanılan nöron adı verilen bir alt sınıfıdır PNS nöronların izolasyonu için bir strateji geliştirmiştir<sup&gt; 1,2</sup&gt;. Bu nöronlar sert chitinous larva manikür altında konuma ulaşmak için çok zor saf bir nüfus olarak izole etmek için son derece düşük bir olay nedeniyle zor ve. Yeni geliştirilen yöntem, bu zorlukları aşar ve antikor kaplı manyetik boncuklar kullanarak hızlı ve belirli bir hücre zenginleştirme dayanmaktadır. Manyetik boncuk sıralama çalışmaları için, bir fare CD8 etiketli GFP füzyon proteini (ifade yaş eşleştirilmiş üçüncü instar larvaları kullanmış<em&gt; UAS-mCD8-GFP</em&gt;)<sup&gt; 3</sup&gt; Sınıfı IV dendritik arborization ya kontrol altında nöron spesifik (da)<em&gt; Pickpocket (PPK)-GAL4</em&gt; Driver<sup&gt; 4</sup&gt; Ya da pan-da nöron-spesifik GAL4 kontrolü<sup&gt; 21-7</sup&gt; Driver<sup&gt; 5</sup&gt;. Bu protokol, birkaç parametre değişen, larva manikür iç duvara bağlı PNS hücreleri izole etmek için optimize edilmiş olsa da, aynı protokolü larva veya pupa aşamasında manikür bağlı birçok farklı hücre türleri izole etmek için kullanılır. geliştirme (örneğin epitel, kas, oenocytes vb), veya GAL4 özel sürücü ifade desen bağlı olarak larva organların diğer hücre türleri. Bu yöntem ile izole RNA yüksek kalitede ve kolayca mikroarray gen ekspresyon profili çalışmaları gibi downstream genomik analizler için kullanılabilir. Bu yaklaşım, izole çalışmaları gerçekleştirmek için yeni ve güçlü bir araç sunar<em&gt; Drosophila</emBöylece dendrit morfolojilerinden altında yatan moleküler mekanizmaları, yeni bakış açıları sunan dendritik arborization (da) nöronlar.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting at JoVE.com

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Bu video makalede, izolasyonu ve saflaştırılması için bir yöntem mevcut<em&gt; Drosophila</em&gt; Hızlı bir manyetik boncuk destekli hücre sıralama stratejisi kullanarak periferik nöronlar. Izole hücrelerinden elde edilen RNA kolayca mikroarray analizleri de dahil olmak üzere alt uygulamalar için kullanılabilir.

İzolasyon ve Arıtma Drosophila</emManyetik Boncuk Sıralama> Periferik Nöronlar

The Drosophila peripheral nervous system (PNS) is a powerful model for investigating the complex processes of neuronal development and dendrite ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Purification of Drosophila Peripheral Neurons by Magnetic Bead Sorting

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Organik Solvent ve Asetik Asit olmadan Jeller Coomassie G-250 ile Proteinlerin Boyama

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Dayanıksız Multi-protein Kompleksleri izolasyonu In vivo Kontrollü Hücresel Çapraz Bağlama ve immuno-manyetik Afinite Kromatografisi

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Kinesin İzolasyonu ve Saflaştırılması gelen Drosophila Embriyolar

Motor proteins move cargos along microtubules, and transport them to specific sub-cellular locations. Because altered transport is suggested to underlie a ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

RNA Saflaştırma tarafından Kromatin İzolasyon (chirp)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

Floresans Aktif Hücre Ayırma (FACS) Taze Dokular Normal ve Kanser ilişkili Fibroblastlar İzolasyonu

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are the most prominent cell type within the tumor stroma of many cancers, in particular breast carcinoma, and their ...

Purification of Transcripts and Metabolites from Drosophila Heads

Purification of Transcripts and Metabolites from Drosophila Heads

Transkript ve Metabolitler gelen saflaştırılması<em&gt; Drosophila</em&gt; Kafaları

For the last decade, we have tried to understand the molecular and cellular mechanisms of neuronal degeneration using Drosophila as a model organism. ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Kültürlü organel Ulaşım<em&gt; Drosophila</em&gt; Hücreler: S2 Hücre Hattı ve İlköğretim Nöronlar.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Protein-protein etkileşimi belirlenmesi<em&gt; Drosophila</emTandem Affinity Arıtma tarafından&gt; Adult Başlar (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Doku Ayrışma Ve Diferansiyel süzülerek Nakli İçin Mitokondri Of Rapid İzolasyon ve saflaştırma

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

İzolasyon ve Arıtma Drosophila Periferik Nöronlar