Name: microvolume protein concentration determination using the nanodrop 2000c spectrophotometer
Uploaded: 2009-11-04T16:00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microvolume Protein Concentration Determination using the NanoDrop 2000c Spectrophotometer at JoVE.com

<ol>
	<li>Aitken, A., Learmonth, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+determination+by+UV+absorption.">Protein determination by UV absorption.</a> , (1996).</li><li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding.">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> <em style='font-style: italic'>Anal. Biochem</em>. <b>72</b>, 248-254 (1976).</li><li>Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A., Randall, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+measurement+with+the+Folin+phenol+reagent.">Protein measurement with the Folin phenol reagent.</a> <em style='font-style: italic'>J. Biol. Chem</em>. <b>193</b>, 265-275 (1951).</li><li>Reisner, A. H., Nemes, P., Bucholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Coomassie+Brilliant+Blue+G250+perchloric+acid+solution+for+staining+in+electrophoresis+and+isoelectric+focusing+on+polyacrilamide+gels.">Use of Coomassie Brilliant Blue G250 perchloric acid solution for staining in electrophoresis and isoelectric focusing on polyacrilamide gels.</a> <em style='font-style: italic'>Anal. Biochem</em>. <b>64</b>, 509-516 (1975).</li><li>Simonian, M. H., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrophotometric+and+colorimetric+determination+of+protein+concentration.">Spectrophotometric and colorimetric determination of protein concentration.</a> <em style='font-style: italic'>Curr. Protoc. Mol. Biol. 10:1A.17</em>. , (2006).</li><li>Smith, P. K., Krohn, R. I., Hermanson, G. T., Mallia, A. K., Gartner, F. H., Provenzano, F. u. j. i. m. o. t. o., Goeke, E. K., Olson, N. M., J, B., Klenk, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid.">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> <em style='font-style: italic'>Anal. Biochem</em>. <b>150</b>, 76-85 (1985).</li><li>Stoscheck, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+protein.">Quantitation of protein.</a> <em style='font-style: italic'>Meth. Enzymol</em>. <b>182</b>, 50-68 (1990).</li></ol>

<p class="jove_content"> Авторы являются сотрудниками Thermo Fisher Scientific, которая производит реактивы и инструменты, используемые в этой статье. </p>

<p class="jove_content"> Микрообъеме количественного использует внутреннюю поверхностного натяжения свойства образца формы столба жидкости между двумя поверхностями измерения. Отсутствие сдерживания устройства, позволяет длина пути изменить в режиме реального времени, по существу устраняет необходимость выполнять разведения. Эта возможность значительно увеличивает динамический диапазон концентрации белка, а также скорость измерения. Используя минимальное количество образца, большое количество образцов может быть проанализирована быстро и точно, что позволяет ученым принять более измерений и достижения лучшего контроля качества. Кроме того, и, если необходимо, драгоценные образцы могут быть восстановлены после того, измерения. Когда такие небольшие объемы измеряются, образцы однородности является чрезвычайно важным, чтобы избежать ошибки выборки. Низкий наконечники для пипеток удержания всегда должны быть использованы для загрузки образцов и советы должны быть изменены между образцом повторяет. Пьедестал поверхности должны быть надлежащим образом очищены и обусловленным, чтобы обеспечить наиболее точные результаты. Наконец, спектрофотометр микрообъеме идеально подходит, когда образец является ограниченным, однако, простота использования, скорость и обширная динамический диапазон спектрометра делают его подходящим, когда образец имеется в изобилии. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NanoDrop 2000c Spectrophotometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laboratory wipes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>23250</td>
<td>Reducing agent compatible</td>
</tr>
<tr>
<td>PR-1 Reconditioning Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

microvolume protein concentration determination using the nanodrop 2000c spectrophotometer

<p class="jove_content"> Традиционные спектрофотометрии требует размещения образцов в кювет или капилляров. Это часто нецелесообразно из-за ограниченных объемов проб часто используется для анализа белков. Thermo Scientific NanoDrop 2000c Спектрофотометр решает этот вопрос с инновационной системой удержания образца, который содержит образцы микрообъеме между двумя измерения поверхностей с использованием поверхностного натяжения свойства жидкостей, что позволяет количественно образцов в объемах ниже, чем 0.5-2 мкл. Устранение кювет или капилляров позволяет в режиме реального времени изменения в длине пути, который уменьшает время измерения при значительном увеличении динамического диапазона концентраций белка, которые могут быть измерены. Необходимость разведения также устранены, и подготовка образцов количественного относительно легко, как измерение поверхности можно просто протереть лаборатории салфеткой. Это видео статье представлены модификации традиционных методов определения концентрации белка для количественного определения количества белка микрообъеме использованием A280 считывание абсорбции или анализа BCA колориметрических. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Microvolume Protein Concentration Determination using the NanoDrop 2000c Spectrophotometer at JoVE.com

Microvolume Protein Concentration Determination using the NanoDrop 2000c Spectrophotometer

<p class="jove_content">Микрообъеме образцы количественно с помощью спектрофотометра система, которая использует природный поверхностного натяжения, чтобы сохранить образцы без использования кювет или капилляров. Динамический диапазон белков концентрации и скорость, с которой они могут быть измерены значительно повышаются с этим методом.</p>

Микрообъеме концентрации белка Определение использованием NanoDrop 2000c Спектрофотометр

Traditional spectrophotometry requires placing samples into cuvettes or capillaries. This is often impractical due to the limited sample volumes often ...

<p><a class="grey_button" href="/video/1770">&#x4E2D;&#x6587;</a><a class="grey_button" href="/video/1920">Deutsch</a>   <a class="grey_button" href="/video/1921">Fran&#231;ais</a>  <a class="grey_button" href="/video/1922"> Espa&ntilde;ol </a>  <a class="grey_button" href="/video/2187"> &#x65E5;&#x672C;&#x8A9E; </a> </p>

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

Важность правильной концентрации белка для кинетики и Affinity Определение в структурно-функционального анализа

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Использование GELFREE 8100 Фракционирование Система Молекулярный вес основе фракционирования с жидким этапе восстановления

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

Анализ развития Морфологические Фенотип как функция концентрации белка в почкующихся дрожжей

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in <em>Xenopus laevis</em>

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Ткань Определение Использование трансплантации животных Cap (ACT) в Пробирной<em> Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Quantification of dsDNA using the Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer and PicoGreen Dye

Количественная оценка дцДНК использованием Hitachi F-7000 Флуоресцентный спектрофотометр и PicoGreen Dye

Quantification of DNA, especially in small concentrations, is an important task with a wide range of biological applications including standard molecular ...

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

NanoDrop микрообъеме Количественное определение нуклеиновых кислот

Biomolecular assays are continually being developed that use progressively smaller amounts of material, often precluding the use of conventional ...

Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

Определение концентрации нуклеиновых кислот и белков Использование Micro объемом Био-спецификации Nano Спектрофотометр

Nucleic Acid quantitation procedures have advanced significantly in the last three decades.  More and more, molecular biologists require consistent ...

Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis

Очистки белков-Free метод привязки Определение Affinity по Микромасштабные Термофорез

Quantitative characterization of protein  interactions is essential in practically any field of life sciences,  particularly drug discovery. Most of ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

Определение белков-лиганд с использованием дифференциальной сканирующей флуориметрии

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...