Name: derivation of hematopoietic stem cells from murine embryonic stem cells
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells at JoVE.com

<p class="jove_step"> Différenciation des cellules souches embryonnaires </p><ol><li> Recueillir un flacon à proximité de confluence des cellules souches embryonnaires (CSE), via un traitement avec la trypsine ESC. </li><li> Resuspendre les cellules dans 5 ml de milieu de différenciation et de transférer à un T25 sans gélatine couché. Incuber à 37 ° C pendant 45 minutes. Récupérer le surnageant et recueillir les cellules par centrifugation. <br /><br /> <em>Note: les fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) de l&#39;ESC cultures a...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>C57Bl/6 Rag-2/gamma-c deficient mice</td>
<td>Animal</td>
<td>Taconic Farm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate shaker</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>33998-360</td>
<td>Orbital Shaker by Ikaworks</td>
</tr>
<tr>
<td>Multi-channel pipettor</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>15000-174</td>
<td>ePet by BioHit</td>
</tr>
<tr>
<td>ES trypsin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15090-046</td>
<td>0.25% Trypsin in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Standard trypsin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invtrogen</td>
<td>25300-062</td>
<td>0.05% Trypsin-EDTA</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>20012-027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Enzyme-free dissociation buffer</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13151-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissociation enzyme mix</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17104-019</td>
<td>500 mg Collagenase IV</td>
</tr>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H2126</td>
<td>freeze in 500 uL aliquots and avoid repeated freezing and thawing.</td>
</tr>
<tr>
<td>DNAse</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>D4527</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10-017CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protamine sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P3369</td>
<td>8 ug/mL</td>
</tr>
<tr>
<td>EB differentiation media</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>10% IMDM</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>10% IMDM+cytokines</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>20% anti-MEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

derivation of hematopoietic stem cells from murine embryonic stem cells

<p class="jove_content">Une cellule souche est définie comme une cellule avec la capacité à la fois à l&#39;auto-renouvellement et de générer de multiples descendance différenciée. Les cellules souches embryonnaires (CSE) sont dérivées de la blastocyste de l&#39;embryon précoce et sont pluripotentes dans la capacité de différenciation. Leur potentiel de différenciation majorité en a fait l&#39;objet de nombreuses recherches centrées sur la façon de les déduire coaxial pour générer des types cellulaires cliniquement utiles. La dérivation réussie de cellules souches hématopoïétiques (CSH) de la souris ESC a récemment été accompli et peuvent être visualisées dans ce protocole vidéo. HSC, sans doute la population cellulaire la plus cliniquement exploitées, sont utilisés pour traiter une multitude de cancers hématopoïétiques et troubles. Toutefois, de nombreux patients qui pourraient bénéficier d&#39;un traitement HSC n&#39;ont pas accès aux bailleurs de fonds appropriés. ESC pourrait fournir une source alternative de HSC pour ces patients. Le protocole suivant établit une base à partir desquelles l&#39;ESC-HSC peuvent être étudiés et les efforts visant à isoler les CSH de CSE humaines. Dans ce protocole, l&#39;ESC sont différenciées comme des corps embryoïdes (EBS) pour 6 jours dans le sérum disponible dans le commerce présélectionnés pour la différenciation hématopoïétique optimale. EB sont alors dissociées et infectés par HOXB4 rétroviraux. Infected EB cellules dérivées sont étalées sur OP9 stroma de la moelle osseuse de cellules stromales dérivées de la ligne de la calvaria de M-CSF / - souris, et co-cultivées en présence de l&#39;hématopoïèse promotion des cytokines pendant dix jours. Lors de cette co-culture, les cellules infectées connaissent une forte expansion, ce qui entraîne la génération d&#39;une piscine hétérogène de 100s de millions de cellules. Ces cellules peuvent ensuite être utilisées à des souris de sauvetage et de reconstituer une irradiation létale.</p>

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Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

<p class="jove_content">Ce protocole décrit la dérivation de cellules souches hématopoïétiques transplantables à partir des cellules souches embryonnaires de souris (CES) et leur injection ultérieure dans des souris irradiées de façon létale bénéficiaires. Brièvement, l&#39;ESC sont différenciées comme des corps embryoïdes, qui sont ensuite infectées par HOXB4 rétroviraux et co-cultivées avec des cellules stromales et OP9 cytokines hématopoïétiques.</p>

Dérivation de cellules souches hématopoïétiques de cellules souches embryonnaires murines

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

L&#39;isolement et la transplantation de cellules souches hématopoïétiques (CSH)

Recherche

Biologie

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Dérivation des cellules souches embryonnaires humaines par Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Isolement et analyse de cellules souches hématopoïétiques à partir du placenta

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Immunoprécipitation de la chromatine des cellules souches embryonnaires humaines

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

L&#39;isolement des premiers cellules souches hématopoïétiques de murin sac vitellin et AGA

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

L&#39;isolement et la dérivation de cellules germinales embryonnaires de souris

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Dérivation de cellules souches de la souris Trophoblast à partir de blastocystes

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

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Dérivation efficace des ressources humaines précurseurs cardiaques et les cardiomyocytes à partir pluripotentes cellules souches embryonnaires humaines à l&#39;induction de petites molécules

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

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Analyse phénotypique et isolement de cellules souches hématopoïétiques murines et Lineage-engagés progéniteurs

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Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induction et analyse des épithéliale à mésenchymateuses transition

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