Name: derivation of hematopoietic stem cells from murine embryonic stem cells
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells at JoVE.com

<p class="jove_step"> Differenziazione delle cellule staminali embrionali </p><ol><li> Raccogliere un pallone vicino confluenti di cellule staminali embrionali (ESC) tramite trattamento con tripsina ESC. </li><li> Risospendere le cellule in 5 ml di mezzi di differenziazione e trasferimento in un non-gelatina rivestito T25. Incubare a 37 ° C per 45 minuti. Recuperare il surnatante e raccogliere le cellule tramite centrifugazione. <br /><br /> <em>Nota: fibroblasti embrionali di topo (MEF) dalle culture CES collegare facilmente al non-gelatina r...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>C57Bl/6 Rag-2/gamma-c deficient mice</td>
<td>Animal</td>
<td>Taconic Farm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate shaker</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>33998-360</td>
<td>Orbital Shaker by Ikaworks</td>
</tr>
<tr>
<td>Multi-channel pipettor</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>15000-174</td>
<td>ePet by BioHit</td>
</tr>
<tr>
<td>ES trypsin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15090-046</td>
<td>0.25% Trypsin in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Standard trypsin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invtrogen</td>
<td>25300-062</td>
<td>0.05% Trypsin-EDTA</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>20012-027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Enzyme-free dissociation buffer</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13151-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissociation enzyme mix</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17104-019</td>
<td>500 mg Collagenase IV</td>
</tr>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H2126</td>
<td>freeze in 500 uL aliquots and avoid repeated freezing and thawing.</td>
</tr>
<tr>
<td>DNAse</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>D4527</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10-017CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protamine sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P3369</td>
<td>8 ug/mL</td>
</tr>
<tr>
<td>EB differentiation media</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>10% IMDM</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>10% IMDM+cytokines</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>20% anti-MEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

derivation of hematopoietic stem cells from murine embryonic stem cells

<p class="jove_content">Una cellula staminale è definito come una cella con la capacità di entrambe le auto-rinnovarsi e di generare più progenie differenziata. Le cellule staminali embrionali (ESC) sono derivate dalla blastocisti dell&#39;embrione precoce e sono pluripotenti in grado differenziativo. Il loro potenziale differenziativo vasta li ha resi oggetto di ricerche molto centrata sulla dedurre il modo di convincere loro di generare tipi di cellule clinicamente utili. La derivazione di successo di cellule staminali ematopoietiche (HSC) da topo CES è stato recentemente compiuto e possono essere visualizzati in questo protocollo video. HSC, probabilmente la popolazione di cellule clinicamente più sfruttati, sono usati per trattare una miriade di tumori ematopoietici e disturbi. Tuttavia, molti pazienti che potrebbero trarre beneficio dalla terapia HSC non hanno accesso ai donatori idonei. ESC potrebbe fornire una fonte alternativa di HSC per questi pazienti. Il seguente protocollo stabilisce una linea di base da cui ESC-HSC possono essere studiati e informare gli sforzi per isolare da HSC umane ESC. In questo protocollo, ESC si differenziano come corpi embrionali (EBS) per 6 giorni nel commercio sierici pre-screening per la differenziazione ottimale ematopoietiche. EBS sono dissociati e poi infettati con HoxB4 retrovirali. Infetti EB cellule derivate sono placcati in OP9 stroma, un stromali del midollo osseo linea cellulare deriva dalla calvaria di M-CSF-/ - topi, e co-coltura in presenza di ematopoiesi promuovere citochine per dieci giorni. Durante questo co-coltura, le cellule infette espandere notevolmente e si traducono nella generazione un pool eterogeneo di 100s di milioni di cellule. Queste cellule possono quindi essere utilizzati per topi salvataggio e ricostituire letale irradiati.</p>

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Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

<p class="jove_content">Questa dettagli del protocollo la derivazione di cellule staminali ematopoietiche trapiantabili da topo cellule staminali embrionali (ESC) e la loro successiva iniezione in topi irradiati letalmente destinatario. In breve, ESC si differenziano come corpi embrionali, che sono poi infettati con HoxB4 retrovirali e co-coltura con cellule stromali OP9 e citochine ematopoietiche.</p>

Derivazione di cellule staminali ematopoietiche da cellule staminali embrionali murini

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

Isolamento e trapianto di cellule staminali emopoietiche (CSE)

Ricerca

Biologia

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivazione di cellule staminali embrionali umane da Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Isolamento e analisi delle cellule staminali ematopoietiche dalla placenta

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Immunoprecipitazione della cromatina di cellule staminali embrionali umane

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Isolamento delle prime cellule staminali emopoietiche da murini sacco vitellino e AGM

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

L&#39;isolamento e la derivazione di cellule embrionali del mouse Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Derivazione di cellule staminali trofoblasto mouse da blastocisti

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Derivazione efficiente dei diritti dell&#39;uomo e precursori cardiaci e cardiomiociti pluripotenti da cellule staminali embrionali umane con induzione piccole molecole

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

L&#39;analisi fenotipica e l&#39;isolamento di murini cellule staminali ematopoietiche e Lineage-committed progenitori

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induzione e Analisi dei epiteliale a Mesenchymal Transizione

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...