Name: derivation of hematopoietic stem cells from murine embryonic stem cells
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00
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<p class="jove_step"> 배아 줄기 세포의 분화 </p><ol><li> ESC 트립신과 치료를 통해 배아 줄기 세포 (ESC)의 근처에 합류 플라스크를 수집합니다. </li><li> 차별화 미디어 5 ML에서 세포를 Resuspend가 아닌 젤라틴 코팅 T25로 전송할 수 있습니다. 37 품어 ° C를 45 분 정도 사용합니다. 뜨는 회수하여 원심 분리를 통해 세포를 수집합니다. <br /><br /> <em>참고 : ESC 문화에서 마우스 배아 섬유아 세포 (MEFs)가 아닌 젤라틴 코팅 T25에 쉽게 ?...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>C57Bl/6 Rag-2/gamma-c deficient mice</td>
<td>Animal</td>
<td>Taconic Farm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plate shaker</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>33998-360</td>
<td>Orbital Shaker by Ikaworks</td>
</tr>
<tr>
<td>Multi-channel pipettor</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>15000-174</td>
<td>ePet by BioHit</td>
</tr>
<tr>
<td>ES trypsin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15090-046</td>
<td>0.25% Trypsin in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Standard trypsin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invtrogen</td>
<td>25300-062</td>
<td>0.05% Trypsin-EDTA</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>20012-027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Enzyme-free dissociation buffer</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13151-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissociation enzyme mix</td>
<td>Buffer</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17104-019</td>
<td>500 mg Collagenase IV</td>
</tr>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H2126</td>
<td>freeze in 500 uL aliquots and avoid repeated freezing and thawing.</td>
</tr>
<tr>
<td>DNAse</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>D4527</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10-017CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protamine sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P3369</td>
<td>8 ug/mL</td>
</tr>
<tr>
<td>EB differentiation media</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>10% IMDM</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>10% IMDM+cytokines</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>
<tr>
<td>20% anti-MEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Please view recipe on attached Protocol.doc</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

derivation of hematopoietic stem cells from murine embryonic stem cells

<p class="jove_content">줄기 세포가 수있는 능력을 가진 세포로 정의 모두 자기 갱신 여러 차별 자손을 생성합니다. 배아 줄기 세포 (ESC)은 초기 배아의 blastocyst에서 파생된 및 differentiative 능력 pluripotent입니다. 그들의 광대한 differentiative 가능성들을 임상적으로 유용한 세포 유형을 생성하기 위해 그들을 동축 케이블하는 방법 deducing을 중심으로 많은 연구의 초점이되었다. 마우스 ESC에서 조혈 줄기 세포 (HSC)의 성공적인 유도가 최근 완성되었으며이 비디오 프로토콜의 시각하실 수 있습니다. HSC, 거의 틀림없이 가장 임상적으로 악용 세포 인구는 조혈 malignancies 및 장애의 무수한를 치료하는 데 사용됩니다. 그러나, HSC 치료 혜택을 누릴 수 많은 환자가 적합한 기증자에 대한 액세스를 부족합니다. ESC는 이러한 환자 HSC의 대체 소스를 제공할 수. 다음 프로토콜은 ESC - HSC이 공부하고 인간 ESC에서 HSC를 격리하는 노력을 알려 될 수있는 기준을 설정합니다. 이 프로토콜에서는 ESC가 상용 혈청 사전 검사를 최적의 조혈 차별화 6 일 동안 embryoid 기관 (EBS)로 구별됩니다. EBS 다음 dissociated과 retroviral HoxB4에 감염됩니다. 마우스, 그리고 열흘 동안 크린 시토킨를 추진하고 조혈의 존재 공동 교양 - 감염된 EB - 파생 전지 OP9 기질, M - CSF - /의 calvaria에서 파생된 골수 stromal 세포 라인에 도금입니다. 이 공동의 문화 중에 감염된 세포는 세대 세포의 수백만의 100s의 이기종 수영장 결과 크게 확장합니다. 이러한 전지는 다음 구조와 reconstitute lethally 조사 마우스로 사용할 수 있습니다.</p>

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Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

<p class="jove_content">이 프로토콜 세부 마우스 배아의 줄기 세포 (ESC)와 lethally 조사받는 마우스에 그들의 이후의 주입에서 transplantable 조혈 줄기 세포의 유도. 간단히, ESC는 다음 retroviral HoxB4 및 OP9 stromal 세포와 조혈 크린 시토킨 공동 양식에 감염된 embryoid 단체로 구별됩니다.</p>

Murine 배아 줄기 세포로부터 조혈 줄기 세포의 유도

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

분리 및 조혈 줄기 세포의 이식 (HSCs)

연구

생물학

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

태반에서 조혈 줄기 세포의 분리 및 분석

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

인간 배아 줄기 세포에서 염색질의 Immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Murine 난황과 AGM에서 조기 조혈 줄기 세포의 분리

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

절연 및 마우스 배아 새싹 세포의 유도

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Blastocysts에서 마우스 Trophoblast의 줄기 세포의 유도

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

작은 분자와 유도 Pluripotent 인간 배아 줄기 세포로부터 인간 심장 엽 성의 전구 물질과 Cardiomyocytes의 효율 유도

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

Murine 조혈 줄기 세포와 리니지 - 헌신 Progenitors의 Phenotypic 분석 및 절연

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

간엽 전환을 유도하고 상피의 분석

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...