Name: preparation of embryos for electron microscopy of the drosophila embryonic heart tube
Uploaded: 2009-12-21T10:00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube at JoVE.com

وأيد عملنا على تشكيل أنبوب القلب عن طريق منحة من مؤسسة العلوم الوطنية (ID جائزة 0744165) لSGK

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد طازجة 2ml حل تثبيتي غلوتارالدهيد تحتوي على 12.5 ٪ في المخزن كاكوديلات 50mM (pH7.4) في قارورة زجاجية 20 مل التلألؤ. إضافة 8ml من N - هيبتان ويهز بقوة. السماح للمرحلتين منفصلتين. إزالة المرحلة العليا التي تحتوي على N - هيبتان مشبعة غلوتارالدهيد ، مكان إلى قارورة التلألؤ نظيفة وتوضع جانبا. وسوف يكون هذا هو الحل مثبت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأجنة 00-20 ساعة باستخدام غرفة جمع الأجنة ، وهي سلة صغيرة مع ادخال شبكة القابلة للإزالة. إزالة الغشاء الخارجي المشيماء الأجنة تمرغ في محلول التبييض 50 ٪ لمدة 2-3 دقائق أو حتى الأجنة تطفو الى السطح من التبييض. شطف جيدا مع أجنة ddH20 وصمة عار على منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط ، التقط ادخال شبكة وهو مغطى الأجنة dechorionated ومكان في حل تثبيتي ، والسماح لأجنة تسقط من عيون. السماح للأجنة لإصلاح 1.5 ساعة في 4 درجات مئوية في حين خلط على Nutator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد طبق بتري واصطف مع وجهين الشريط. إزالة أجنة من تثبيتي باستخدام الماصة باستور ووضعها على سطح مسجلة من dish.Transfer بيتري الأجنة في الحد الأدنى من حل تثبيتي لمنع هيبتان تثبيتي في حل من الغراء الشريط. يهز طبق بيتري لجعل طبقة واحدة من الأجنة. طبق بتري في مكان غطاء حتى يتبخر هيبتان. إضافة يكفي PBS Tween20 + 0.1 ٪ لتغطية الأجنة. اليد devitellinize أواخر المرحلة 16 الأجنة تحت المجهر تشريح بإبرة حادة التنغستن. استعادة أجنة مع الماصة باستور في أنبوب 1.5 مل microfuge. وتنفذ الخطوات 5-7 في microfuge هذا الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف الأجنة في 0.1M كاكوديلات العازلة ، ودرجة الحموضة 7.4 ثم في محلول يحتوي على 1 ٪ في رباعي أكسيد الأوزميوم 0.1M كاكوديلات العازلة ، ودرجة الحموضة 7.4 لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة إصلاح آخر. شطف الأجنة مع 0.1M كاكوديلات العازلة ، ودرجة الحموضة 7.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى الأجنة في سلسلة متدرجة من الايثانول والأسيتون. يذوى الأجنة الايثانول مع 50 ٪ لمدة 10 دقيقة ، تليها الإيثانول 70 ٪ لمدة 10 دقيقة. يذوى ثم في الأسيتون 90 ٪ لمدة 10 دقيقة ، واثنين من الاسيتون 100 ٪ الخطوات من 10 دقيقة لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأسيتون إزالة ومن ثم تبدأ عملية تسلل بإضافة EPON - Spurr 01:01 الراتنج : مزيج الأسيتون إلى الأجنة. الميكروويف لمدة ثلاث دقائق باستخدام الميكروويف بيلكو برو Biowave مع الحفاظ على عينة تحت ضغط الفراغ. الضغط على فراغ العينة لخمس دقائق إضافية بعد الميكروويف قد انتهت. تبادل الراتنج 1:1 ، مزيج الأسيتون مع الراتنج EPON Spurr - 100 ٪ والميكروويف مرة أخرى تحت ضغط الفراغ. صرف 100 ٪ EPON - Spurr راتنج مرة أخيرة ، والموجات الدقيقة تحت ضغط الفراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الماصة باستور ، يتم نقل الأجنة من أنبوب microfuge إلى سيليكون العفن التضمين. محاذاة الأجنة في صف واحد مثل هذا الامر في نهاية الخلفي للجنين بمحاذاة الحافة مع مدبب من العفن. يخبز في فرن 70 درجة مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة العينة والتحضير لsectioning. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبدأ خفض 1μm المقاطع باستخدام سكين Histo الماس وريشير Ultracut مشراح E. يحيط علما عندما يتم التوصل إلى قسم أول جنين. من هذه النقطة ، وقطع 100μm في العينة. إزالة المقطع باستخدام حلقة ، ومكان على شريحة زجاجية. الحرارة لفترة وجيزة المقطع على طبق ساخن. وصمة عار المقطع باستخدام قطرة الميثيلين الأزرق. تحت المجهر ضوء تحديد تجويف القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع المقاطع 90nm باستخدام الترا الماس 45 درجة سكين وريشير Ultracut مشراح E. التقاط مقاطع متعددة على الشبكة النحاسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هي ملطخة الشبكات مع خلات اليورانيل 3 ٪ المشبعة في الإيثانول 50 ٪ لمدة عشر دقائق ثم تشطف ثلاث مرات في الماء المقطر مزدوجة. ثم ، وأساء إلى شبكات مع سترات الرصاص (0.04gms المذاب في الماء المقطر 10ML المزدوجة وهيدروكسيد الصوديوم 100ML 10M) لمدة 2.5 دقيقة في غرفة تحتوي على كريات هيدروكسيد الصوديوم لخلق CO 2 بيئة خالية. وتشطف ثلاث مرات في شبكات الماء المقطر مزدوجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم فحص الأجزاء مع المجهر الإلكتروني JEOL 1200EX في 80Kv ، وتصويرها بكاميرا رقمية AMT. </li></ol>

<ol>
	<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Development+of+Cellular+Junctions+in+the+Drosophila+embryo.">The Development of Cellular Junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161, 563-596 (1994).</li><li>Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila Protocols. , (2000).</li><li>Santiago-Martinez, E., Soplop, N. H., Patel, R., Kramer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repulsion+by+Slit+and+Roundabout+prevents+Shotgun/E-cadherin-mediated+cell+adhesion+during+Drosophila+heart+tube+lumen+formation.">Repulsion by Slit and Roundabout prevents Shotgun/E-cadherin-mediated cell adhesion during Drosophila heart tube lumen formation.</a> J. Cell Biol. 182, 241-248 (2008).</li></ol>

برزت التشكل من القلب الجنينية ذبابة الفاكهة أنبوب كنظام نموذجا قيما لدراسة التصاق الخلايا ويتغير شكل الخلية أثناء التطور الجنيني. واحدة من التحديات التي تواجهها في دراسة هذا الهيكل هو أن تجويف أنبوب القلب من الصعب تصور الأجنة في جبل بأكمله. وقد أثبتت هذه التقنية تظاهروا في هذا الفيديو ، الذي تم تكييفه من الإجراءات المذكورة سابقا 1-2 ، لتكون ناجحة في كفاءة وموثوق بها وتحليل عدد كبير من المورثات لأنبوب تجويف القلب وتشكيل 3.

preparation of embryos for electron microscopy of the drosophila embryonic heart tube

في التشكل من<em&gt; ذبابة الفاكهة</emوقد برزت&gt; أنبوب القلب الجنينية كنظام نموذجا قيما لدراسة الهجرة الخلية ، خلية خلية التصاق ويتغير شكل الخلية أثناء التطور الجنيني. واحدة من التحديات التي تواجهها في دراسة هذا الهيكل هو أن تجويف أنبوب القلب ، فضلا عن ميزات غشاء التي تعتبر حاسمة بالنسبة لتشكيل أنبوب القلب ، ويصعب تصور الأجنة في جبل بأكمله ، وذلك بسبب صغر حجم أنبوب القلب وداخل الفضاء lumenal نسبة إلى الجنين. استخدام المجهر الإلكتروني انتقال يسمح للتضخم أعلى من هذه الهياكل ويعطي ميزة لفحص الأجنة في المقطع العرضي ، الذي يكشف بسهولة حجم وشكل التجويف. في هذا الفيديو ، ونحن من التفاصيل عن عملية التثبيت موثوق بها ، والتضمين ، والمرحلة المتأخرة من sectioning<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; أجنة من أجل رؤية تجويف أنبوب القلب ، فضلا عن الهياكل الخلوية الهامة بما في ذلك خلية خلية تقاطعات والغشاء القاعدي.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube at JoVE.com

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

نحن تصف عملية لترسيخ وتثبيت ، sectioning ، والتصوير من مرحلة متأخرة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة المجهري للإلكترون Trasmission للأنبوب القلب الجنينية. هذا الأسلوب يسمح للتصور من تجويف أنبوب القلب وكذلك الغشاء القاعدي ، والتي خطوط تجويف القلب.

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

التحضير للثقافات متعلق بالخلايا العصبية من أجنة ذبابة الفاكهة المرحلة Midgastrula

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

لإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لايف التصوير باستخدام بروتوكول إسقاط الشنق

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

بطاقات المواد الفلورية ذبابة الفاكهة</emهياكل القلب>

The Drosophila melanogaster dorsal vessel, or heart, is a tubular structure comprised of a single layer of contractile cardiomyocytes, pericardial cells ...

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

إعداد ذبابة الفاكهة خلايا S2 الميكروسكوب لايت

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

رواية<em&gt; خارج الحي</em&gt; الطريقة الثقافة لالجنينية القلب

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

إعداد ذبابة الفاكهة والتصوير الطولي من وظيفة القلب في فيفو باستخدام البصرية بالاتساق المجهري (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

نموذج إعداد وتصوير اكسوسوميس مجهر إلكتروني

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

إعداد عينة المنمنمة مجهر إلكتروني

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

إعداد العينات البيولوجية بالتجميد ذات الضغط العالي، وتعزيز النقيض ساعدت الموجات الدقيقة، والحد الأدنى راتنج التضمين لتصوير حجم

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...