Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
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Die Autoren möchten die unschätzbare Hilfe zu bestätigen: Dr. Neal First und Kourtney Wilkinson für Manuskript-Bearbeitung; Dr. Lucy Senter, Dr. Brigit Willeford und Mike Basett für die Unterstützung bei Ausbildung und Pflege der Tiere an der MSU ALAC akkreditierten Maus-Anlage, Dr. Dwayne Wise für seine Unterstützung bei der Mikroskopie und Bilderfassung; Cesar Monroy, Hannah Swoope und Bobbie Huddleston für ihre Unterstützung mit Video-Produktion an der MSU. Diese Arbeit wurde vom Office of Institutional Research und dem Department of Biological Sciences an der Mississippi State University gefördert.

Teil 1: Schwangere Maus Laparotomie <ol><li> Mit Genickbruch, euthanize eine schwangere C57BL6J weiblichen Maus bei 10,5-11,5 dpc. </li><li> Reinigen Sie den Bauch mit antimikrobieller Seife, und dann rasieren sie. </li><li> Nach der Rasur, waschen den Bauch mit einer Kochsalzlösung. </li><li> Dann trocknen die Bauchhöhle mit einer sterilen Gaze. </li><li> Decken Sie die Maus mit einem neuen sterilen Bereich. </li><li> Machen Sie eine ventrale Inzision mit einer Pinzette und Schere Dissektion. </li><li> Und entferne...

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	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Zange Nr. 14 und 15, Skalpell 35 mm, Dissektion Scheren, chirurgischen Bereichen, antimikrobielle Seife, Kochsalzlösung 0,9%, Gaze, Eis-Schaum-Behälter, Rasierklinge, Skalpell 35 mm, feinen Pinzette Nr. 4 und 5, feine Hänseleien Nadel mit Griff-, Filter-Papierbögen, und zog Glaspipetten.<br /<br /&gt; Equipment: Sezieren Stereomikroskop Lichtquelle Schott Fostec, inverse Mikroskop Mikropipette 10 und 200 &amp;mgr; l, Zentrifuge, bio Sicherheit Kabinett.

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

Die Fähigkeit von embryonalen Keimzellen (EG) in primordialen Keimzellen (PGC) und später in Keimzellen während der frühen Entwicklungsstadien zu unterscheiden, ist eine perfekte Modell, um unsere Hypothese über Krebs und Unfruchtbarkeit Adresse. Dieses Protokoll zeigt, wie Ur-Keimzellen aus Entwicklungsländern Gonaden in 10,5-11,5 Tage nach coitum (DPC) Maus-Embryonen zu isolieren. Die Entwicklung der Gonaden Kämme aus Maus-Embryonen (C57BL6J) wurden durch mechanische Störungen mit Kollagenase, dann in einem Maus-Embryo-Fibroblasten-Feeder-Schicht (MEF-CF1), die zuvor mitotisch mit Mitomycin C wurde in Anwesenheit von Knockout-Medien inaktiviert und ergänzt mit Leukämie Inhibitor vernickelt dissoziiert Factor (LIF), basischen Fibroblasten-Wachstumsfaktor (bFGF) und Stem Cell Factor (SCF). Mit diesen optimierten Methoden für PCG Identifikation, Isolierung und Etablierung der Kulturbedingungen ermöglicht langfristig Kulturen von EG-Zellen für mehr als 40 Tage. Die embryonalen Keimzelle Linien zeigten embryonalen Phänotyp und die Expression von häufig verwendeten Marker der pluripotenten Zustand. Isolation und Ableitung von Keimzellen in der Kultur ein Instrument, um ihre Entwicklung in vitro zu verstehen und bieten die Möglichkeit, kumulative Schäden an genetischen und epigenetischen zu überwachen nach der Exposition gegenüber oxidativem Stress.

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Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Die Fähigkeit von embryonalen Keimzellen in primordialen Keimzellen während der frühen Entwicklungsstadien zu unterscheiden, ist eine perfekte Modell, um unsere Hypothese über Krebs und Unfruchtbarkeit Adresse. Dieses Protokoll zeigt, wie Ur-Keimzellen aus Entwicklungsländern Gonaden in 10,5-11,5 Tage nach coitum Maus-Embryonen zu isolieren.

Isolation und Ableitung von embryonalen Maus-Keimzellen

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Ableitung von hämatopoetischen Stammzellen aus embryonalen Stammzellen der Maus

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Forschung

Biologie

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen durch Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Ableitung der Maus Trophoblast Stammzellen aus Blastozysten

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adulten und embryonalen Skelettmuskel Microexplant Kultur und Isolation der Skelettmuskulatur Stem Cells

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Isolierung und Kultivierung von Avian Embryonale Valvular Progenitorzellen

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Isolierung und Kultivierung von Zellen aus dem Nephrogene Zone der embryonalen Maus Niere

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Effiziente Ableitung von Human Cardiac Vorstufen und Kardiomyozyten aus pluripotenten humanen embryonalen Stammzellen mit Small Molecule Induction

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Vorbereitung von embryonalen Maus-Fibroblasten-Zellen zum Kultivieren von humanen embryonalen und induzierten pluripotenten Stammzellen

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Isolierung von embryonalen ventrikuläre Endothelzellen

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolierung und Kultivierung von primären Maus Azinuszellen des Pankreas

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...