Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
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, डॉ. लुसी Senter, डा. ब्रिजिट Willeford और MSU ALAC मान्यता प्राप्त माउस सुविधा प्रशिक्षण और जानवरों की देखभाल के साथ सहायता के लिए माइक Basett, डॉ. ड्वेन समझदार डॉ. नील पहले और पांडुलिपि संपादन के लिए Kourtney विल्किनसन: लेखकों के अमूल्य मदद स्वीकार करते हैं करना चाहते हैं Cesar Monroy, हन्ना Swoope, और MSU में वीडियो उत्पादन के साथ उनकी सहायता के लिए Bobbie हडलस्टन, माइक्रोस्कोपी और छवि पर कब्जा के साथ उसकी सहायता के लिए. इस शोध संस्थागत अनुसंधान और मिसिसिपी राज्य विश्वविद्यालय में जीव विज्ञान विभाग के कार्यालय द्वारा वित्त पोषित किया गया था.

भाग 1: गर्भवती माउस laparotomy <ol><li> ग्रीवा अव्यवस्था का प्रयोग, 10.5-11.5 डीपीसी में एक गर्भवती महिला माउस C57BL6J euthanize. </li><li> रोगाणुरोधी साबुन के साथ पेट को साफ करें, और तब, यह दाढ़ी. </li><li> हजामत बनाने के बाद, एक नमकीन घोल के साथ ?...

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	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

संदंश सं 14 और 15, स्केलपेल 35 मिमी, विच्छेदन कैंची, शल्य चिकित्सा क्षेत्र, रोगाणुरोधी साबुन, नमकीन घोल 0.9%, धुंध, बर्फ फोम कंटेनर, रेजर ब्लेड, स्केलपेल 35 मिमी, ठीक संदंश नंबर 4 और 5, ठीक चिढ़ा सुई के साथ संभाल, पेपर शीट, फिल्टर और कांच pipettes खींच लिया.<br /<br /&gt; उपकरण: विदारक stereomicroscope, प्रकाश स्रोत Schott Fostec, उलटा माइक्रोस्कोप, 10 micropipette और 200ul, अपकेंद्रित्र, जैव सुरक्षा मंत्रिमंडल.

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

भ्रूण कीटाणु कोशिकाओं की क्षमता (जैसे) के प्रारंभिक विकास चरणों के दौरान मौलिक कीटाणु कोशिकाओं (PGCs) में और बाद में gametes में अंतर करने के लिए एक आदर्श कैंसर और बांझपन के बारे में हमारी परिकल्पना पता मॉडल है. इस प्रोटोकॉल पता चलता है कि कैसे 10.5-11.5 दिनों के बाद coitum (डीपीसी) माउस भ्रूण में विकासशील gonads से मौलिक कीटाणु कोशिकाओं को अलग करने के लिए. माउस भ्रूण से gonadal लकीरें का विकास (C57BL6J) collagenase के साथ यांत्रिक विघटन, तो एक माउस भ्रूण fibroblast फीडर (MEF - CF1) परत है कि पहले mitotically mitomycin सी के साथ पीटा मीडिया की उपस्थिति में निष्क्रिय और लेकिमिया अवरोध करनेवाला के साथ पूरक में चढ़ाया द्वारा अलग थे (LIF) फैक्टर, बुनियादी fibroblast वृद्धि कारक (bFGF), और स्टेम सेल फैक्टर (SCF). PCG पहचान, अलगाव, संस्कृति शर्तों के और स्थापना के लिए इन अनुकूलित विधियों का प्रयोग अधिक से अधिक 40 दिनों के लिए ईजी कोशिकाओं के दीर्घकालिक संस्कृतियों परमिट. भ्रूण कीटाणु सेल लाइनों भ्रूण और pluripotent राज्य के आम उपयोग मार्करों के phenotype अभिव्यक्ति दिखाया. अलगाव और संस्कृति में कीटाणु कोशिकाओं की व्युत्पत्ति एक उपकरण के लिए इन विट्रो में उनके विकास को समझने और आनुवंशिक और epigenetic स्तर पर oxidative तनाव के प्रदर्शन के बाद संचयी नुकसान की निगरानी करने का अवसर प्रदान करते हैं प्रदान करते हैं.

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Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

भ्रूण कीटाणु कोशिकाओं के प्रारंभिक विकास चरणों के दौरान मौलिक कीटाणु कोशिकाओं में अंतर करने की क्षमता के लिए एक आदर्श कैंसर और बांझपन के बारे में हमारी परिकल्पना पता मॉडल है. इस प्रोटोकॉल पता चलता है कि कैसे 10.5-11.5 दिनों के बाद coitum माउस भ्रूण में विकासशील gonads से मौलिक कीटाणु कोशिकाओं को अलग करने के लिए.

अलगाव और माउस भ्रूणीय कीटाणु कक्ष की व्युत्पत्ति

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से hematopoietic स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Immunosurgery द्वारा व्युत्पत्ति

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Blastocysts से माउस ट्रोफोब्लास्ट स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

वयस्क और भ्रूण के कंकाल की मांसपेशी Microexplant संस्कृति और कंकाल की मांसपेशी स्टेम सेल के अलगाव

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

अलगाव और एवियन भ्रूणीय वाल्वुलर पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की संस्कृति

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

और भ्रूण माउस किडनी की nephrogenic क्षेत्र से कक्ष के अलगाव और संस्कृति

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

लघु अणु प्रेरण के साथ pluripotent मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से मानव कार्डिएक व्यापारियों और cardiomyocytes के कुशल व्युत्पत्ति

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

माउस भ्रूण fibroblast कोशिकाओं संवर्धन मानव भ्रूण और प्रेरित pluripotent स्टेम सेल के लिए उपयुक्त की तैयारी

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

भ्रूण निलय endothelial कोशिकाओं के अलगाव

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

माउस प्राथमिक अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...