Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare per la preziosa collaborazione di: Dott. Neal First e Kourtney Wilkinson per il manoscritto di editing; Dr. Lucy Senter, il Dr. Brigit Willeford e Mike Basett per l&#39;assistenza con cura la formazione e animali presso la struttura del mouse ALAC MSU accreditati; Dr. Dwayne Wise per la sua assistenza con la microscopia e la cattura dell&#39;immagine; Cesar Monroy, Hannah Swoope, e Bobbie Huddleston per la loro assistenza con la produzione video a MSU. Questa ricerca è stata finanziata dall&#39;Ufficio di ricerca istituzionale e il Dipartimento di Scienze Biologiche presso Mississippi State University.

Parte 1: Laparotomia mouse in gravidanza <ol><li> Utilizzando dislocazione cervicale, l&#39;eutanasia un topo gravide C57BL6J femminile a 10,5-11,5 dpc. </li><li> Pulire l&#39;addome con sapone antimicrobico, e poi, radersi. </li><li> Dopo la rasatura, lavare l&#39;addome con una soluzione salina. </li><li> Poi, a secco l&#39;addome con una garza sterile. </li><li> Coprire il mouse con un nuovo campo sterile. </li><li> Effettuare una incisione ventrale con pinze e forbici dissezione. </li><li> Identificare e rimuovere...

<ol>
	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Pinze n. 14 e 15, bisturi 35 mm, forbici dissezione, campi chirurgici, sapone antisettico, soluzione salina 0,9%, garza, schiuma contenitore di ghiaccio, lama di rasoio, bisturi 35 mm, pinza sottile n ° 4 e 5, con ago sottile presa in giro con maniglia, filtro fogli di carta, e tirò pipette di vetro.<br /<br /&gt; Equipaggiamento: stereomicroscopio da dissezione, sorgente luminosa Schott Fostec, microscopio invertito, micropipetta 10 e 200ul, centrifuga, cappa di sicurezza biologica.

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

La capacità di cellule embrionali germinali (EG) a differenziarsi in cellule germinali primordiali (PGC) e più tardi in gameti durante le prime fasi di sviluppo è un modello perfetto per affrontare la nostra ipotesi sul cancro e la sterilità. Questo protocollo mostra come isolare le cellule germinali primordiali di gonadi in via di sviluppo 10,5-11,5 giorni post coitum (DPC), embrioni di topo. Lo sviluppo di creste delle gonadi da embrioni di topo (C57BL6J) erano dissociate dalla rottura meccanica con collagenasi, poi placcato in uno strato di fibroblasti di topo alimentatore embrione (MEF-CF1) che precedentemente era mitoticamente inattivati ​​con mitomicina C in presenza di mezzi di comunicazione ad eliminazione diretta e integrata con Inibitore leucemia Factor (LIF), fondamentale fattore di crescita dei fibroblasti (bFGF), e Stem Cell Factor (SCF). L&#39;utilizzo di questi metodi di ottimizzazione per l&#39;identificazione PCG, l&#39;isolamento, e la creazione di condizioni di coltura permette di culture a lungo termine delle cellule EG per più di 40 giorni. Le linee sulle cellule germinali hanno mostrato fenotipo embrionale ed espressione di marcatori comuni usati dello stato pluripotente. L&#39;isolamento e la derivazione di cellule germinali in coltura fornire uno strumento per comprendere il loro sviluppo in vitro e offrono la possibilità di monitorare i danni cumulativi a livelli genetici ed epigenetici dopo l&#39;esposizione allo stress ossidativo.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells at JoVE.com

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

La capacità di cellule germinali embrionali di differenziarsi in cellule germinali primordiali durante le prime fasi di sviluppo è un modello perfetto per affrontare la nostra ipotesi sul cancro e la sterilità. Questo protocollo mostra come isolare le cellule germinali primordiali di gonadi in via di sviluppo 10,5-11,5 embrioni giorni post coitum mouse.

L&#39;isolamento e la derivazione di cellule embrionali del mouse Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivazione di cellule staminali ematopoietiche da cellule staminali embrionali murini

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Ricerca

Biologia

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivazione di cellule staminali embrionali umane da Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Derivazione di cellule staminali trofoblasto mouse da blastocisti

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adulte e embrionali muscolo scheletrico Microexplant Cultura e isolamento di cellule staminali del muscolo scheletrico

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Isolamento e la coltura di cellule embrionali aviaria progenitrici valvolare

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Isolamento e coltura di cellule dalla Zona nefrogenica del Rene embrionali di topo

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Derivazione efficiente dei diritti dell&#39;uomo e precursori cardiaci e cardiomiociti pluripotenti da cellule staminali embrionali umane con induzione piccole molecole

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Preparazione di cellule di fibroblasti embrionali di topo adatto per colture di cellule pluripotenti umane embrionali e staminali indotta

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Isolamento della embrionali ventricolari cellule endoteliali

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolamento e Cultura del mouse principale acinose pancreatiche Cellule

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...