Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
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;博士ルーシーセンター、博士ブリジットウィルフォードとMSU ALAC認定マウスの施設での研修や動物のケアと支援のためのマイクBasett、博士ドウェインワイズ博士ニールまず、原稿編集のためKourtneyウィルキンソン：著者はの非常に貴重な助けに感謝セザールモンロイ、ハンナスウォープ、およびMSUのビデオ制作とその支援のためのボビーハドルストン、顕微鏡と画像キャプチャと彼の支援のための。この研究は、インスティテューショナルリサーチとミシシッピ州立大学で生物科学科のオフィスによって資金を供給された。

パート1：妊娠中のマウスの開腹<ol><li>頸椎脱臼を使用して、10.5から11.5 DPCで妊娠C57BL6J雌マウスを安楽死させる。 </li><li>その後抗菌石鹸で腹部をきれいに、そして、それを剃る。 </li><li>シェービング後は、生理食塩水で腹部を洗う。 </li><li>その後、滅菌ガーゼで腹部を乾かします。 </li><li>新しい滅菌フィールドでマウスをカバー。 </li><li>鉗子と解剖鋏を使用して腹側切開を行います。 </li...

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	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

鉗子14号、15、メス35ミリメートル、解剖ハサミ、外科分野、抗菌石鹸、生理食塩水0.9％、ガーゼ、氷の泡コンテナ、カミソリの刃、メス35ミリメートル、微細な鉗子第4と5、罰金からかい針ハンドル、ろ紙シート、およびガラスピペットを引っ張った。<br /<br /&gt;設備：解剖顕微鏡、光源ショットFostec、倒立顕微鏡、マイクロピペット10、200ul、遠心分離、バイオセーフティキャビネット。

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

初期の発達段階の間に後で配偶子への始原生殖細胞（始原生殖細胞）に分化し、胚性生殖細胞の能力（EG）は、がんと不妊についての我々の仮説に対応するために最適なモデルです。このプロトコルは、10.5から11.5日後に交尾（DPC）のマウス胚での開発生殖腺から始原生殖細胞を単離する方法を示しています。マウス胚から生殖腺隆起（C57BL6J）を開発してから以前に分裂ノックアウト媒体の存在下でマイトマイシンCで不活化し、白血病阻害剤を添加したマウス胚線維芽細胞のフィーダー層（MEF - CF1）に播種、コラゲナーゼと機械的な破砕により解離させた因子（LIF）、塩基性線維芽細胞増殖因子（bFGF）、および幹細胞因子（SCF）。培養条件のPCG識別、分離、および確立のためにこれらの最適化されたメソッドを使用すると、40日以上用EG細胞の長期培養を可能にします。胚性生殖細胞系は、多能性の状態の一般的な使用されるマーカーの胚の表現型と発現を示した。単離および培養中の胚細胞の派生は、in vitroでその開発を理解し、酸化ストレスへの曝露後の遺伝的およびエピジェネティックなレベルでの累積損傷を監視する機会を提供するツールを提供しています。

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Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

開発の初期段階で始原生殖細胞に分化する胚性生殖細胞の能力は、がんと不妊についての我々の仮説に対応するために最適なモデルです。このプロトコルは、10.5から11.5日後に交尾のマウス胚での開発生殖腺から始原生殖細胞を単離する方法を示しています。

マウスES胚細胞の単離と導出

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

マウス胚性幹細胞から造血幹細胞の導出

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

免疫手術でヒト胚性幹細胞の導出

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

胚盤胞からマウス栄養膜幹細胞の導出

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

大人と胚骨格筋のMicroexplantの文化と骨格筋幹細胞の単離

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

鳥類胚弁膜前駆細胞の単離と培養

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

マウス胎児の腎臓の腎性帯からの細胞の単離と培養

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

小分子の誘導と多能性ヒト胚性幹細胞からヒト心筋前駆体と心筋細胞の効率的な導出

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

培養ヒト胚および誘導多能性幹細胞に適したマウス胚性線維芽細胞の調製

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

胚心室内皮細胞の単離

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

マウスプライマリ膵臓腺房細胞の単離と培養

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...