Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
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Os autores gostariam de agradecer a ajuda inestimável de: Dr. Neal First e Kourtney Wilkinson para manuscrito edição; Dr Lucy Senter, Dr. Brigit Willeford e Mike Basett de assistência com a formação e animal cuidados na instalação do mouse MSU ALAC credenciados; Dr. Dwayne Sábio por sua assistência com microscopia e captura de imagem; Cesar Monroy, Hannah Swoope, e Bobbie Huddleston por sua assistência com a produção de vídeo na MSU. Esta pesquisa foi financiada pelo Instituto de Pesquisa Institucional e do Departamento de Ciências Biológicas da Mississippi State University.

Parte 1: Laparotomia rato grávidas <ol><li> Usando deslocamento cervical, euthanize um rato C57BL6J fêmea grávida em 10,5-11,5 dpc. </li><li> Limpe o abdômen com sabão antimicrobiano, e em seguida, fazer a barba dele. </li><li> Após o barbear, lavar o abdômen com uma solução salina. </li><li> Depois, seque o abdômen com uma gaze estéril. </li><li> Cobrir o mouse com um novo campo estéril. </li><li> Faça uma incisão ventral usando uma pinça e tesouras de dissecação. </li><li> Identificar e remover todo...

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	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Pinça N º 14 e 15, 35 mm bisturi, tesouras de dissecação, campos cirúrgicos, sabão antimicrobiano, solução salina 0,9%, gaze, recipiente de espuma de gelo, lâmina de barbear, bisturi de 35 mm, pinças de multa n º 4 e 5, provocando agulha fina com manusear, filtro de folhas de papel, e puxou pipetas de vidro.<br /<br /&gt; Equipamento: estereomicroscópio dissecação, fonte de luz Schott Fostec, microscópio invertido, micropipeta 10 e 200ul, centrífuga, bio Gabinete de segurança.

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

A capacidade de células germinais embrionárias (EG) de se diferenciar em células germinativas primordiais (PGCs) e mais tarde em gametas durante as primeiras fases de desenvolvimento é um modelo perfeito para resolver a nossa hipótese sobre o câncer e infertilidade. Este protocolo mostra como isolar células germinativas primordiais das gônadas em desenvolvimento 10,5-11,5 dias pós coitum embriões (DPC) do mouse. Desenvolvimento gonadal cumes de embriões de camundongos (C57BL6J) foram dissociadas pela ruptura mecânica com colagenase, então banhado em um rato camada de alimentador de embrião de fibroblastos (MEF-CF1) que foi previamente mitoticamente inativada com mitomicina C na presença de mídia nocaute e suplementada com inibidor de leucemia fator (LIF), fator de crescimento básico de fibroblastos (bFGF) e fator de Stem Cell (SCF). Usando esses métodos otimizados para a identificação PCG, isolamento e estabelecimento de condições de cultura permite culturas de longo prazo de células EG por mais de 40 dias. O embrionárias linhagens de células germinais embrionárias mostrou fenótipo e expressão de marcadores utilizados comum do estado pluripotente. Isolamento e derivação de células germinais na cultura fornecer uma ferramenta para entender o seu desenvolvimento in vitro e oferecer a oportunidade de acompanhar os danos cumulativos ao nível genético e epigenético após a exposição ao estresse oxidativo.

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Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

A capacidade de células germinais embrionárias de se diferenciarem em células germinativas primordiais durante estágios iniciais de desenvolvimento é um modelo perfeito para abordar nossa hipótese sobre o câncer e infertilidade. Este protocolo mostra como isolar células germinativas primordiais das gônadas em desenvolvimento 10,5-11,5 dias após a embriões de camundongos coitum.

Isolamento e derivação de células embrionárias de rato Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivação de Células-Tronco Hematopoéticas murino de Células-Tronco Embrionárias

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Biologia

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivação de células estaminais embrionárias humanas por Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Derivação de células-tronco do rato trofoblasto de blastocistos

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adultas e embrionárias Cultura Microexplant Músculo Esquelético e isolamento de células-tronco musculares

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Isolamento e Cultura da Avian embrionárias Células Progenitoras Valvular

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Isolamento e cultura de células da zona nefrogênica do rim do rato embrionárias

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Derivação eficiente dos recursos humanos Precursores cardíaca e Cardiomyocytes pluripotentes a partir de células estaminais embrionárias humanas com a indução de moléculas pequenas

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Preparação de células embrionárias de camundongos Fibroblastos adequados para a cultura de células-tronco embrionárias humanas e pluripotentes induzidas

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Isolamento de Células Embrionárias ventriculares endoteliais

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolamento e Cultura do mouse primárias células pancreáticas acinares

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...