Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
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Los autores desean agradecer la ayuda inestimable de: Dr. Neal First y Kourtney Wilkinson manuscrito de edición, Dr. Lucy Senter, Dr. Brigit Willeford y Mike Basett de ayuda con el cuidado y entrenamiento de los animales en las instalaciones de MSU ALAC ratón acreditados, el Dr. Dwayne Sabio por su ayuda con la microscopía y la captura de imágenes, César Monroy, Swoope Hannah, y Bobbie Huddleston por su ayuda en la producción de vídeo en la MSU. Esta investigación fue financiada por la Oficina de Investigación Institucional y el Departamento de Ciencias Biológicas de la Universidad Estatal de Mississippi.

Parte 1: La laparotomía ratón embarazadas <ol><li> Por dislocación cervical, la eutanasia a una mujer embarazada ratón C57BL6J femenina en 10,5-11,5 DPC. </li><li> Limpia el abdomen con jabón antiséptico, y luego, se le exige. </li><li> Después de afeitarse, lavar el abdomen con una solución salina. </li><li> A continuación, seque el abdomen con una gasa estéril. </li><li> Cubrir el ratón con un campo estéril. </li><li> Haga una incisión ventral con las pinzas y tijeras de disección. </li><li> Identifica...

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	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Pinzas N º 14 y 15, 35 mm de bisturí, tijeras de disección, campos quirúrgicos, jabón antiséptico, solución salina al 0,9%, la gasa, el contenedor de hielo de espuma, cuchilla de afeitar, bisturí de 35 mm, pinzas finas N º 4 y 5, con aguja fina con bromas mango, hojas de papel filtro, y tiró de pipetas de vidrio.<br /<br /&gt; Equipo: microscopio estereoscópico de disección, la fuente de luz Schott Fostec, microscopio invertido, micropipeta 10 y 200ul, centrífuga, el gabinete de seguridad biológica.

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

La capacidad de las células germinales embrionarias (EG) a diferenciarse en células germinales primordiales (PGC) y más tarde en los gametos durante las primeras etapas de desarrollo es un modelo perfecto para hacer frente a nuestra hipótesis sobre el cáncer y la infertilidad. Este protocolo se muestra la forma de aislar las células germinales primordiales de las gónadas en desarrollo en 10.5-11.5 días después de embriones de ratón coitum (dpc). El desarrollo de las crestas gonadales de embriones de ratón (C57BL6J) se disocian por rotura mecánica con colagenasa, está chapada en una capa de fibroblastos de embriones de ratón de alimentación (MEF-CF1) que antes era mitóticamente inactivados con mitomicina C en la presencia de los medios de octavos de final y que será completada con un inhibidor de la leucemia Factor (LIF), el factor de crecimiento de fibroblastos (bFGF), y factor de células madre (SCF). El uso de estos métodos optimizados para la identificación del PCG, el aislamiento, y el establecimiento de condiciones de cultivo permite que las culturas a largo plazo de las células EG de más de 40 días. Las líneas embrionarias germinales de células mostró fenotipo embrionario y la expresión de marcadores utilizados común del estado pluripotente. El aislamiento y la derivación de células germinales en la cultura una herramienta para entender su desarrollo in vitro y ofrece la oportunidad de controlar el daño acumulado en los niveles genéticos y epigenéticos que después de la exposición al estrés oxidativo.

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Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

La capacidad de las células germinales embrionarias a diferenciarse en células germinales primordiales durante etapas tempranas del desarrollo es un modelo perfecto para hacer frente a nuestra hipótesis sobre el cáncer y la infertilidad. Este protocolo se muestra la forma de aislar las células germinales primordiales de las gónadas en desarrollo de embriones de 10.5 a 11.5 días después de ratón coitum.

El aislamiento y la derivación de células embrionarias de ratón Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivación de células madre hematopoyéticas de células madre embrionarias murinas

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Investigación

Biología

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivación de células estaminales embrionarias humanas por Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Derivación de células madre de ratón a partir de blastocistos Trofoblasto

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adultas y embrionarias del músculo esquelético Cultura Microexplant y aislamiento de células madre de músculo esquelético

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Aislamiento y cultivo de células embrionarias progenitoras aviar valvular

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Aislamiento y cultivo de células de la zona nefrogénica del riñón de embriones de ratón

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Derivación eficiente de los Derechos Humanos precursores cardiacos y cardiomiocitos de pluripotentes células madre embrionarias humanas mediante la inducción de moléculas pequeñas

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Preparación de las células embrionarias de fibroblastos de ratón adecuados para el cultivo de células estaminales embrionarias humanas pluripotentes inducidas, y

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

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Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Aislamiento y cultivo de ratón primarias células acinares pancreáticas

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...