Name: isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells at JoVE.com

Författarna vill tacka för den ovärderliga hjälp av Dr Neal Först och Kourtney Wilkinson för manuskriptet redigering, Dr Lucy Senter, Dr Brigit Willeford och Mike Basett för hjälp med utbildning och djuromsorg vid MSU ALAC ackrediterade musen anläggning, Dr Dwayne Wise för hans hjälp med mikroskopi och ta bilder, Cesar Monroy, Hannah Swoope och Bobbie Huddleston för deras hjälp med videoproduktion vid MSU. Denna forskning har finansierats av byrån för institutionell forskning och Institutionen för biologiska vetenskaper vid Mississippi State University.

Del 1: Gravida Mouse Laparotomy <ol><li> Använda halsdislokation, euthanize en gravid C57BL6J hanmöss vid 10,5-11,5 DPC. </li><li> Rengör buken med antimikrobiell tvål, och sedan, raka den. </li><li> Efter rakning, tvätta buken med en saltlösning. </li><li> Sedan torka buken med en steril gasbinda. </li><li> Täck med musen med ett nytt sterilt område. </li><li> Gör en ventral snitt med hjälp av pincett och sax dissekering. </li><li> Identifiera och ta bort hela livmodern från bukhålan. Musembryon kommer at...

<ol>
	<li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A laboratory Handbook. 1, 73-85 (1998).</li><li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells.">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li><li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M., Sharp, P. T., Mason, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+12:+Mouse+Primordial+Germ+Cells:+isolation+and+in+vitro+culture.">Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture.</a> Molecular embryology: methods and protocols. 97, (1999).</li><li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis.">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li><li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification.">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li><li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+MEFs+to+Matrigel+I:+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs.">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

Tång nr 14 och 15, skalpell 35 mm, dissektion sax, kirurgisk fält, antimikrobiell tvål, saltlösning 0,9%, gasbinda, is skum container, rakblad, skalpell 35 mm, fin pincett nr 4 och 5, fina retas nålen med handtag, filterpapper ark, och drog glaspipetter.<br /<br /&gt; Utrustning: dissekera stereomikroskop, ljuskälla Schott Fostec, inverterat mikroskop, mikropipett 10 och 200ul, centrifug, bio säkerhetsbänk.

isolation and derivation of mouse embryonic germinal cells

Förmågan hos embryonala embryon celler (t.ex.) att differentieras till ursprungliga embryon celler (PGCs) och senare i könsceller under tidiga utvecklingsstadier är en perfekt modell för att ta itu med vår hypotes om cancer och infertilitet. Detta protokoll visar hur man kan isolera ursprungliga embryon celler från att utvecklas gonaderna 10,5-11,5 dagar efter coitum (DPC) musembryon. Utveckla gonad åsar från mus embryon (C57BL6J) har tagit avstånd genom mekanisk störning med kollagenas, sedan beläggas med en mus embryo fibroblast feeder layer (MEF-CF1) som tidigare var mitotically inaktiveras med mitomycin C i närvaro av knockout medier och kompletteras med leukemi Inhibitor Factor (LIF), grundläggande Fibroblast Growth Factor (bFGF) och Stem Cell Factor (SCF). Med hjälp av dessa optimerade metoder för PCG identifiering, isolering, och etablering av odlingsbetingelser tillåter långsiktiga kulturer av EG celler för mer än 40 dagar. Den embryonala embryon cellinjer visade embryonala fenotyp och uttryck för gemensamma används markörer av pluripotenta staten. Isolering och härledning av embryon celler i kultur som ett verktyg för att förstå deras utveckling in vitro och ger möjlighet att följa kumulativa skador på genetisk och epigenetisk nivå efter exponering för oxidativ stress.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells at JoVE.com

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Förmågan hos embryonala embryon cellerna differentieras till primordial embryon celler under tidiga utvecklingsskeden är ett perfekt sätt att hantera vår hypotes om cancer och infertilitet. Detta protokoll visar hur man kan isolera ursprungliga embryon celler från att utvecklas gonaderna 10,5-11,5 dagar mus inlägg coitum embryon.

Isolering och Härledning av Mouse Embryonala Germinal celler

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Härledning av hematopoetiska stamceller från Murine embryonala stamceller

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivering av mänskliga embryonala stamceller genom Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Härledning av Stem Mus trofoblasten Celler från Blastocyster

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adulta och embryonala skelettmuskler Microexplant Kultur och Isolering av skelettet muskelceller Stem

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Isolering och odling av aviär Embryonala Klaffel progenitorceller

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Isolering och odling av celler från Nefrogen Zonen av embryonala Mouse Kidney

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Effektiv Derivering av mänskliga Hjärtat prekursorer och Cardiomyocytes från Pluripotenta mänskliga embryonala stamcellslinjer med liten molekyl Induktion

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Beredning av mus Embryonala Fibroblastceller Lämplig för odling av humana embryonala och inducerade pluripotenta stamceller

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Isolering av embryonala Ventrikulära Endotelceller

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolering och odling av mus Primära bukspottkörtel Acinar

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...