Name: measuring diffusion coefficients via two-photon fluorescence recovery after photobleaching
Uploaded: 2010-02-26T16:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diffusion Coefficients via Two-photon Fluorescence Recovery After Photobleaching at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد تم تمويل هذا العمل من قبل وزارة الدفاع عصر جائزة الباحث الأمل (رقم W81XWH - 05-0396) ، ثم باحثا في مركز بيو للجائزة العلوم الطبية الحيوية لبراون إدوارد الثالث باء. </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1. محاذاة البصريات. </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> المعدات الرئيسية لتجربة MP - FRAP ما يلي : وضع غير الساحلية مصدر الليزر Pockels الخلية ، (على تعديل شعاع) ، ومولد النبض ، مزدوج اللون ، عدسة موضوعية ومضان تصفية الانبعاثات ، وبوابات أنبوب مضخم للضوء ، ونظام تسجيل البيانا?...

<ol>
	<li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys J</em>. <b>60</b>, 73-76 (1990).</li><li>Brown, E. B., Wu, E. S., Zipfel, W., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+molecular+diffusion+in+solution+by+multiphoton+fluorescence+photobleaching+recovery.">Measurement of molecular diffusion in solution by multiphoton fluorescence photobleaching recovery.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys J</em>. <b>77</b>, 2837-2849 (1999).</li><li>Sullivan, K. D., Sipprell, W. H. B. r. o. w. n., Jr, E. B., Brown, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+model+of+fluorescence+recovery+expands+the+application+of+multiphoton+fluorescence+recover+after+photobleaching+in+vivo.">Improved model of fluorescence recovery expands the application of multiphoton fluorescence recover after photobleaching in vivo.</a> <em style='font-style: italic'>Biophys J</em>. <b>96</b>, 5082-5094 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> قوة متعددة الفوتون مضان الانتعاش بعد photobleaching تكمن في قدرته على تحقيق عينات سميكة مع القرار 3D. منذ تطوره في عام 1990 ، وقد استخدمت MP - FRAP لتحديد معامل نشر (أو المعلمات النقل المماثلة) في أجسام الخلايا ، <em>بحكم فيفو</em> شرائح الأنسجة سميكة ، والأنسجة <em>في الجسم الحي</em> والخل...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ti:sapphire laser</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spectra Physics</td>
<td>Mai Tai</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pockels Cell</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Conoptics</td>
<td>350-80</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laser Scanning Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>Fluoview</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Short pass dichroic mirror</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chroma Technologies</td>
<td>670 DCSX-2P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Photomultiplier tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamamatsu</td>
<td>HC125-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Photon counter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stanford Research Systems</td>
<td>SR 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multi-channel scaler/averager</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stanford Research Systems</td>
<td>SR 430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pulse Generator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stanford Research Systems</td>
<td>DG 535</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>--</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

measuring diffusion coefficients via two-photon fluorescence recovery after photobleaching

<p class="jove_content">متعددة مضان الانتعاش بعد photobleaching هو أسلوب المجهري تستخدم لقياس معامل نشر (أو المعلمات النقل مماثلة) من الجزيئات ، ويمكن تطبيقها على حد سواء<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; النظم البيولوجية. يتم تنفيذ متعددة مضان الانتعاش بعد photobleaching بواسطة photobleaching منطقة المصالح داخل عينة الفلورسنت باستخدام الفلاش الليزر مكثفة ، والمخففة ثم الحزم ورصد مضان كما لا تزال الفلورسنت جزيئات من خارج المنطقة لنزع فتيل الاهتمام ليحل محل جزيئات photobleached . سنبدأ مظاهرة لدينا من قبل محاذاة شعاع الليزر من خلال خلية Pockels (الليزر المغير) وعلى طول مسار بصري من خلال المسح الضوئي والليزر مربع عدسة الهدف العينة. عن البساطة ، وسوف نستخدم عينة من صبغة الفلورسنت مائي. وسوف نحدد ثم المعلمات المناسبة تجريبية لدينا عينة ، بما في ذلك رصد والقوى التبييض ، ومدة التبييض ، بعرض بن (لحساب فوتون) ، ومضان وقت الانتعاش. المقبل ، سنقوم بشرح الإجراء لأخذ منحنيات الانتعاش ، وهي عملية يمكن أن تتم بشكل آلي الى حد كبير عبر ابفيو (LabVIEW) (صكوك الوطنية ، أوستن ، تكساس) لتعزيز الإنتاجية. أخيرا ، يتم تحديد معامل نشر قبل تركيب استعادة البيانات إلى نموذج رياضي ملائم باستخدام خوارزمية تركيب المربعات الصغرى ، برمجة بسهولة باستخدام البرمجيات مثل MATLAB (وMathworks ، ناتيك ، MA).</p>

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Diffusion Coefficients via Two-photon Fluorescence Recovery After Photobleaching at JoVE.com

Measuring Diffusion Coefficients via Two-photon Fluorescence Recovery After Photobleaching

<p class="jove_content">في هذه المقالة سوف نقوم وصف الإجراء لقياس معامل الانتشار باستخدام متعدد الفوتون مضان الانتعاش بعد photobleaching. سنبدأ من خلال تنظيم ليزر على طول المسار الضوئي للعينة ، وتحديد المعايير المناسبة التجريبية ، ثم يستمر توليد وتركيب أخيرا منحنيات الانتعاش مضان.</p>

قياس معاملات إنتشار عبر ثنائي الفوتون الاسترداد بعد الإسفار Photobleaching

Multi-fluorescence recovery after photobleaching is a microscopy technique used to measure the diffusion coefficient (or analogous transport parameters) ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

ثنائي الفوتون axotomy والوقت الفاصل بين التصوير مبائر يعيش في الأجنة الزرد

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

الوقت الفاصل بين التصوير من الانقسام الميتوزي بعد ترنسفكأيشن سيرنا

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

ثنائي الفوتون المستندة إلى تنشيط ضوئي في الأجنة الحية اسماك الزرد

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

<em>In vivo</em> Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

In vivo Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

الكمي <em>في الجسم الحي</em> من التفاعلات بروتين G مستقبلات اقترن به الطيفي ثنائي الفوتون الميكروسكوب

The study of protein interactions in living cells is an important area of research because the information accumulated both benefits industrial ...

Photobleaching Assays (FRAP &amp; FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching Assays FRAP & FLIP to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching فحوصات (FRAP و FLIP) لقياس حيوية الكروماتين البروتين في الخلايا الحية الجذعية الجنينية

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) and Fluorescence Loss In Photobleaching (FLIP) enable the study of protein dynamics in living cells with ...

Mapping Molecular Diffusion in the Plasma Membrane by Multiple-Target Tracing (MTT)

Mapping Molecular Diffusion in the Plasma Membrane by Multiple-Target Tracing MTT

رسم خرائط الانتشار الجزيئي في غشاء البلازما من قبل متعددة الهدف، للبحث عن المفقودين (MTT)

Our goal is to obtain a comprehensive description of molecular processes occurring at cellular membranes in different biological functions. We aim at ...

Easy Measurement of Diffusion Coefficients of EGFP-tagged Plasma Membrane Proteins Using k-Space Image Correlation Spectroscopy

من السهل قياس إنتشار معاملات EGFP الموسومة البروتينات عن طريق غشاء البلازما ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي

Lateral diffusion and compartmentalization of plasma membrane proteins are tightly regulated in cells and thus, studying these processes will reveal new ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

التعافي من اسماك الزرد الكبار قلوب للتطبيقات عالية الإنتاجية

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca<sup>2+</sup> Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

التصوير ثنائي الفوتون من الكالسيوم داخل الخلايا<sup&gt; 2+</sup&gt; المناولة واكسيد النيتريك الإنتاج في البطانية وخلايا العضلات الملساء لعزل الجرذ الأبهر

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic <em>In Vivo</em> Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

Measuring DNA Damage and Repair in Mouse Splenocytes After Chronic In Vivo Exposure to Very Low Doses of Beta- and Gamma-Radiation

قياس الحمض النووي من التلف وإصلاح في ماوس Splenocytes بعد المزمنة<em&gt; في فيفو</em&gt; التعرض لجرعات منخفضة جدا من بيتا وغاما والأشعة السينية

Low dose radiation exposure may produce a variety of biological effects that are different in quantity and quality from the effects produced by high ...