Name: genetic studies of human dna repair proteins using yeast as a model system
Uploaded: 2010-03-18T15:45:00
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この作品は、老化NIH、国立研究所の学内研究プログラムによって完全にサポートされていました。我々は、プラスミドSGS1発現のための酵母菌株と博士ブラッドジョンソン（医学のペンシルバニア大学、フィラデルフィア、ペンシルベニア州）のために博士ロドニーロススタイン（コロンビア大学）を感謝。

1。酵母株野生型SGS1 TOP3を有する株（WT、W303 - 1A、遺伝子型、MAT ADE2 - 1 CANL - 100 HIS3 - 11、15 LEU2 - 3、112 TRPL - L URA3 - 1）[2]、SGS1変異体（W1292 - 3C 、遺伝子型のMAT SUP4 - O：：URA3 SGS1 - 25 ADE2 - 1 CAN1 - 100 HIS3 - 11、15 LEU2 - 3、112 TRP1 - 1 URA3 - 1 rad5 - 535）とSGS1トップ3の変異体（W1058 - 11C、遺伝子型、MAT SUP4 - O：：URA3 SGS1 - 25トップ3 -...

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	<li>Aggarwal, M., Brosh, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WRN+helicase+defective+in+the+premature+aging+disorder+Werner+Syndrome+genetically+interacts+with+Topoisomerase+3+and+restores+the+top3+slow+growth+phenotype+of+sgs1+top3.">WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3.</a> Aging. 1, 219-233 (2009).</li><li>Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yeast+type+I+topoisomerase+Top3+interacts+with+Sgs1,+a+DNA+helicase+homolog:+a+potential+eukaryotic+reverse+gyrase.">The yeast type I topoisomerase Top3 interacts with Sgs1, a DNA helicase homolog: a potential eukaryotic reverse gyrase.</a> Mol Cell Biol. 14, 8391-8398 (1994).</li><li>Shor, E., Gangloff, S., Wagner, M., Weinstein, J., Price, G., Rothstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+homologous+recombination+genes+rescue+top3+slow+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Mutations in homologous recombination genes rescue top3 slow growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Genetics. 162, 647-662 (2002).</li><li>Sharma, S., Sommers, J. A., Brosh, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+function+of+the+conserved+non-catalytic+domain+of+Werner+syndrome+helicase+in+DNA+replication.">In vivo function of the conserved non-catalytic domain of Werner syndrome helicase in DNA replication.</a> Hum Mol Genet. 13, 2247-2261 (2004).</li><li>Gietz, R. D., Schiestl, R. H., Willems, A. R., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+transformation+of+intact+yeast+cells+by+the+LiAc/SS-DNA/PEG+procedure.">Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure.</a> Yeast. 11, 355-360 (1995).</li><li>von Kobbe, C., Thoma, N. H., Czyzewski, B. K., Pavletich, N. P., Bohr, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Werner+syndrome+protein+contains+three+structure+specific+DNA+binding+domains.">Werner syndrome protein contains three structure specific DNA binding domains.</a> J Biol Chem. 278, 52997-53006 (2003).</li></ol>

モデル系として、酵母を使用しての強みの一つは、酵母とヒトの間で保存されて定義されたDNAの複製と修復経路における変異体の可用性です。実験室株は、栄養要求性マーカーとの栄養要求性変異体とベクトルの容易に利用できるように特定の遺伝子を保有する形質転換体のさらなる選択が簡単で信頼性の高いです。これらのベクターを用いた遺伝子産物の発現は、誘導性プロモーターの制?...

genetic studies of human dna repair proteins using yeast as a model system 

遺伝的経路でヒトDNA修復タンパク質の役割を理解することは多くの研究者に大きな課題です。哺乳動物系における遺伝学的研究は、定義されている変異遺伝子の細胞株、規制発現系、および適切な選択マーカーを含むすぐに利用できるツールの不足により制限されてきた。これらの困難を回避するために、下等真核生物のモデル遺伝システムは、機能的に保存されたDNA修復タンパク質や経路の研究のための魅力的な選択肢となっています。我々は、ウェルナー症候群ヘリカーゼ - ヌクレアーゼの不十分な定義遺伝子機能を研究するためのモデルの酵母のシステムを開発した（<em&gt; WRN</em&gt;）の核酸代謝インチ定義されている遺伝的変異体背景に関連する細胞の表現型は、細胞分子機能を明らかにするために調べることができます<em&gt; WRN</em&gt;その触媒活性とタンパク質の相互作用を介して。ヒトの<em&gt; WRN</em酵母での発現のためのDNAプラスミドにクローニングさ&gt;遺伝子と関連する変種は、規制のプラスミド要素の制御下に置くことができます。発現構築物は、方法論の多様によってアッセイ適切な酵母変異体のバックグラウンド、および遺伝的関数に変換することができます。このアプローチを使用して、我々はそれを決定する<em&gt; WRN</em&gt;、その関連RecQファミリーメンバーBLMとSGS1のように、ゲノムの安定性にとって重要である可能性が高いTOP3 -依存性経路で動作します。これは、[1]で我々の最近の出版物に記載されています<a href="http://www.impactaging.com"&gt; www.impactaging.com</a&gt;。酵母の遺伝的相補性試験のための特定のアッセイの詳細な方法は、このホワイトペーパーに記載されています。

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Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System

酵母の遺伝学的研究は、細胞のDNA代謝におけるヒト遺伝子の分子や細胞機能を調べるために用いることができる。メソッドは、人間の遺伝的特性に記載されている<em&gt; WRN</em扱いやすいモデル系としての酵母を使用して機能的に保存された経路の早期老化疾患ウェルナー症候群の欠陥&gt;遺伝子産物。

人間のDNA修復タンパク質の遺伝的研究は、モデルシステムとして酵母を使用

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers.  Genetic studies in mammalian ...

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Biology

Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System 

Microinjection of Medaka Embryos for use as a Model Genetic Organism

モデル遺伝生物として使用するためのメダカ胚のマイクロインジェクション

In this video, we demonstrate the technique of microinjection into one-cell stage medaka embryos. Medaka is a small egg-laying freshwater fish that allows ...

Visualization of DNA Replication in the Vertebrate Model System DT40 using the DNA Fiber Technique

DNAの繊維技術を用いた脊椎動物のモデルシステムのDT40のDNA複製の可視化

Maintenance of replication fork stability is of utmost importance for dividing cells to preserve viability and prevent disease. The processes involved not ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

成長因子Progranulinと相互作用するタンパク質を識別するように変更酵母ツーハイブリッドシステム

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

ヒト心筋細胞の生成：フィーダーフリーヒト人工多能性幹細胞からの分化プロトコル

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

レシオメトリック二分子ビーコンを使用して、生細胞における単エンジニアのRNA転写物のリアルタイムイメージング

The growing realization that both the temporal and spatial regulation of gene expression can have important consequences on cell function has led to the ...

Genetic Barcoding with Fluorescent Proteins for Multiplexed Applications

多重化アプリケーションのための蛍光タンパク質との遺伝バーコーディング

Fluorescent proteins, fluorescent dyes and fluorophores in general have revolutionized the field of molecular cell biology. In particular, the discovery ...

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging (ESI)

Visualization of miniSOG Tagged DNA Repair Proteins in Combination with Electron Spectroscopic Imaging ESI

電子分光イメージングと組み合わせたminiSOGタグ付きのDNA修復タンパク質の可視化（ESI）

The limits to optical resolution and the challenge of identifying specific protein populations in transmission electron microscopy have been obstacles in ...

DNA Electroporation, Isolation and Imaging of Myofibers

DNAエレクトロポレーション、筋線維の単離およびイメージング

Mature muscle has a unique structure that is amenable to live cell imaging. Herein, we describe the experimental protocol for expressing fluorescently ...

Multi-enzyme Screening Using a High-throughput Genetic Enzyme Screening System

マルチ酵素ハイスループット遺伝的酵素スクリーニングシステムを用いたスクリーニング

The recent development of a high-throughput single-cell assay technique enables the screening of novel enzymes based on functional activities from a ...