Name: retro-orbital injection in adult zebrafish
Uploaded: 2009-12-07T18:43:00
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Diese Arbeit wird von Howard Hughes Medical Institute und einen Zuschuss von der NIH für das Studium der embryonalen Blutbildung unterstützt.

Teil 1. Vorbereitung von Injektionsmaterial <ol><li> Tg (Globin: GFP)-Zellen: </li><li> Bleed erwachsenen Spenders Fisch mit 10ul Pipettenspitze in Heparin (1unit/ul) zu punktieren Fisch hinter gill beschichtet. </li><li> Absaugen roten Blutkörperchen und verzichten in der Zelle Puffer (0.9X PBS + 5% FBS + 1% Pen / Strep). </li><li> Filter Zellsuspension über 40um Mesh und bestimmen Konzentration von Zellen mit Hämozytometer wie zuvor von LeBlanc et al. </li><li> Spin nach unten und resuspendieren in Zell-...

<ol>
	<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+route+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model.">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab Animal. 37, 26-32 (2008).</li><li>Pinkerton, W., Webber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+injecting+small+laboratory+animals+by+the+ophthalmic+plexus+route.">A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route.</a> Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).</li><li>White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish.">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li></ol>

Retro-Orbital-Injektion bei erwachsenen Zebrafisch gibt die höchste Effizienz der Lieferung von injizierten Materials in die Blutbahn mit der niedrigsten Inzidenz der Mortalität. Aufgrund der Art der Einspritzung, taucht der Einstichstelle, schnell zu heilen, sinkende das Auftreten von Infektionen und Menge des Blutverlustes. Die Website kann auch wiederholt während einer kurzen Zeit für die tägliche Injektionen von Drogen injiziert werden, zum Beispiel. Große Mengen von Drogen ist fü...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>2106</td>
<td>Preweighed vial of 300 USP units</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine-S</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Western Chemical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MS-222</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran, Texas Red&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>D1830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5mM NaCl 
0.17 mM Kcl 
0.33 mM CaCl2 
0.33 mM MgSO2
</td>
</tr>
<tr>
<td>Microliter Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>80300</td>
<td>701N 10uL SYR (26s/2&#x201D;/2)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

retro-orbital injection in adult zebrafish

Die medikamentöse Behandlung von ganzen Tieren ist ein wichtiges Instrument in jedem Modell für pharmakologische und chemische genetische Studien. Die intravenöse (iv) Injektion ist oft das wirksamste und nicht-invasive Form der Lieferung eines Agenten von Interesse. In der Zebrafisch (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Hat iv Injektion von Medikamenten lange eine Herausforderung, weil der kleine Gefäßdurchmesser worden. Dies hat auch eine wesentliche Hürde für die Injektion von Zellen während der hämatopoetischen Stammzelltransplantation unter Beweis gestellt. In der Vergangenheit wurden Injektionen in die Blutbahn direkt durch das Herz getan. Allerdings hat diese intrakardiale Verfahren eine sehr hohe Sterblichkeitsrate als das Herz ist oft während der Injektion verlassen die Fische anfälliger für Infektionen, massive Blutverlust oder tödliche Organschäden punktiert. Aufbauend auf unserer Erfahrung mit der Maus, haben wir ein neues Injektionsverfahren im Zebrafisch, in denen der Injektionsstelle ist hinter dem Auge und in den retro-orbitalen venösen Sinus entwickelt. Dieses Retro-Orbital (RO) Injektionstechnik wurde erfolgreich sowohl in der Injektion von Medikamenten in der erwachsenen Fische sowie die Transplantation von Knochenmarkzellen gesamte Niere beschäftigt. RO Injektion hat eine viel geringere Sterblichkeit als bei herkömmlichen intrakardiale Injektion. Fische, die retroorbital injiziert werden tendenziell weniger nach der Injektion bluten und sind auf einem viel niedrigeren Risiko von Verletzungen zu einem wichtigen Organ wie das Herz. Ferner wird, wenn richtig durchgeführt, injizierten Zellen und / oder Drogen schnell in die Blutbahn ermöglicht Verbindungen auf ihre Wirkung auf den gesamten Fisch-und Nierenzellen ausüben zu Hause einfach an ihre Nische. So minimiert die neue Injektionstechnik Sterblichkeit und ermöglicht effiziente Bereitstellung von Material in die Blutbahn des erwachsenen Fischen. Hier haben wir beispielhaft für diese Technik durch retro-orbitale Injektion von Tg (<em&gt; Globin</em&gt;: GFP)-Zellen in das Erwachsenenleben<em&gt; Casper</em&gt; Fisch sowie Injektion von einem roten Fluoreszenzfarbstoff (Dextran, Texas Red<em&gt;</em&gt;) In das Erwachsenenleben<em&gt; Casper</em&gt; Fisch. Wir haben dann visualisieren erfolgreichen Injektionen von ganzen Tier Fluoreszenzmikroskopie.

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Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Hier zeigen wir, wie retro-orbitalen Injektion bei erwachsenen Zebrafisch zu tun.

Retro-Orbital-Injection in Adult Zebrafisch

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Die Transplantation von Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafisch

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Forschung

Biologie

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Intraperitoneale Injektion in Adult Zebrafisch

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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Herz Dissection in Larven, juvenile und adulte Zebrafisch, Danio rerio</em

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In-vivo-Elektroporation von Morpholinos in die Adult Zebrafisch Retina

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In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In-vivo-Elektroporation von Morpholinos in das Regenerations Adult Zebrafisch Leitwerk

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