Name: retro-orbital injection in adult zebrafish
Uploaded: 2009-12-07T18:43:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי הווארד יוז רפואי מכון מענק מ-NIH לחקר hematopoiesis עובריים.

חלק 1. הכנת חומר הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tg (גלובין: GFP) בתאים: </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bleed דגים התורם מבוגר באמצעות קצה פיפטה 10ul מצופה הפרין (1unit/ul) לדגים לנקב מאחורי הזימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב כדוריות דם אדומות לוותר ?...

<ol>
	<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+route+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model.">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab Animal. 37, 26-32 (2008).</li><li>Pinkerton, W., Webber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+injecting+small+laboratory+animals+by+the+ophthalmic+plexus+route.">A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route.</a> Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).</li><li>White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish.">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li></ol>

רטרו מסלולית הזרקת דג הזברה מבוגר נותן את היעילות הגבוהה ביותר של מסירת החומר מוזרק לזרם הדם עם השכיחות הנמוכה ביותר של תמותה. בשל אופיו של המקום הזרקה, לנקב מופיע לרפא במהירות, להקטין את המופע של זיהום כמות איבוד הדם. האתר עשוי אפילו להיות מוזרק שוב ושוב במהלך פרק זמן...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>2106</td>
<td>Preweighed vial of 300 USP units</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine-S</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Western Chemical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MS-222</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran, Texas Red&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>D1830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5mM NaCl 
0.17 mM Kcl 
0.33 mM CaCl2 
0.33 mM MgSO2
</td>
</tr>
<tr>
<td>Microliter Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>80300</td>
<td>701N 10uL SYR (26s/2&#x201D;/2)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

retro-orbital injection in adult zebrafish

טיפול תרופתי של בעלי חיים שלמים היא כלי חיוני בכל מערכת מודל מחקרים גנטיים תרופתי כימי. תוך ורידי (IV) הזרקה היא לעתים קרובות בצורה היעילה ביותר פולשנית המסירה של סוכן של עניין. בשנת דג הזברה (<em&gt; Danio rerio</em&gt;), הזרקה של תרופות IV כבר זמן רב אתגר בגלל קוטר כלי שיט קטנים. זו הוכיחה גם משוכה משמעותית עבור הזרקה של תאים במהלך השתלת תא גזע hematopoeitic. מבחינה היסטורית, זריקות לתוך זרם הדם נעשו ישירות דרך הלב. עם זאת, הליך זה תוך לב יש שיעור תמותה גבוה מאוד כמו הלב הוא ניקב לעתים קרובות במהלך ההזרקה עוזב את הדג נוטה, אובדן דם מסיבי זיהום או נזק איבר קטלנית. בהסתמך על הניסיון שלנו עם העכבר, פיתחנו נוהל הזרקה חדשים דג הזברה שבו ההזרקה עומד מאחורי העין לתוך הסינוס רטרו מסלולית ורידי. רטרו מסלולית זו (RO) טכניקת ההזרקה הועסק בהצלחה הזריקה שתי תרופות הדגים הבוגרים וכן השתלה של תאים במח כל כליה. הזרקת RO יש שיעור תמותה נמוך בהרבה מאשר הזרקה תוך הלב המסורתית. דגים כי הם הזריקו רטרו orbitally נוטים לדמם לאחר הזרקה פחות נמצאים בסיכון נמוך הרבה יותר של פגיעה באיבר גדול כמו הלב. תאים נוספים, כאשר היא מבוצעת כהלכה, הזריק ו / או תרופות במהירות ולהיכנס למחזור הדם ומאפשר תרכובות להפעיל השפעתם על הדג שלם ותאי הכליה בקלות הביתה הנישה שלהם. לכן, בטכניקה זו זריקה חדש ממזער תמותה תוך מתן אפשרות אספקה ​​יעילה של החומר לתוך מחזור הדם של הדגים הבוגרים. כאן אנו מדגימים את הטכניקה הזו על ידי הזרקת רטרו ההקפה של Tg (<em&gt; גלובין</em&gt;: GFP) לתוך תאים בוגרים<em&gt; קספר</em&gt; דגים כמו גם זריקת צבע פלואורסצנטי אדום (dextran, טקסס האדום<em&gt;</em&gt;) לתוך מבוגר<em&gt; קספר</em&gt; דגים. לאחר מכן, אנו לדמיין זריקות מוצלחת על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי חיים שלמים.

Watch this Scientific Journal Video about Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish at JoVE.com

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

כאן אנחנו מראים איך לעשות רטרו מסלולית הזרקת דג הזברה מבוגר.

רטרו מסלולית הזרקה של דג הזברה למבוגרים

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

השתלה של מח כליות שלמים דג הזברה למבוגרים

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Zebrafish Brain Ventricle Injection

החדר דג הזברה המוח Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Dissection של איברים מן דג הזברה למבוגרים

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

הזרקה לתוך intraperitoneal דג הזברה למבוגרים

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Dissection של הכליה דג הזברה למבוגרים

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

הלב Dissection ב הזחל, דג הזברה לנוער ו למבוגרים, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך הרשתית דג הזברה למבוגרים

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך למבוגרים התחדשות זנב סנפיר דג הזברה

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

הדם אוסף של ניתוח ביוכימי דג הזברה למבוגרים בלבד

The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging דג הזברה למבוגר

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...