Name: retro-orbital injection in adult zebrafish
Uploaded: 2009-12-07T18:43:00
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Este trabalho é apoiado por Howard Hughes Medical Institute e uma concessão do NIH para o estudo da hematopoiese embrionária.

Parte 1. Preparação de material de injecção <ol><li> Tg (globina: GFP) células: </li><li> Sangrar peixes doadores adultos usando ponteira 10ul revestido em heparina (1unit/ul) para pescar punção por trás de emalhar. </li><li> Aspirar glóbulos vermelhos e dispensar em tampão celular (0.9x PBS + 5% de SFB + 1% Pen / Strep). </li><li> Suspensão de células filtro sobre malha 40uM e determinar a concentração de células usando hemocitômetro como descrito por LeBlanc et al. </li><li> Spin down e ress...

<ol>
	<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+route+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model.">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab Animal. 37, 26-32 (2008).</li><li>Pinkerton, W., Webber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+injecting+small+laboratory+animals+by+the+ophthalmic+plexus+route.">A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route.</a> Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).</li><li>White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish.">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li></ol>

Retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto dá a maior eficiência de entrega de material injetado na corrente sanguínea com a menor incidência de mortalidade. Devido à natureza do local de injeção, a punção parece curar rapidamente, diminuindo a ocorrência de infecção e da quantidade de perda de sangue. O site pode até ser injetado repetidamente durante um curto período de tempo para injeções diárias de medicamentos, por exemplo. Grandes quantidades de droga deve ser compr...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>2106</td>
<td>Preweighed vial of 300 USP units</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine-S</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Western Chemical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MS-222</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran, Texas Red&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>D1830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5mM NaCl 
0.17 mM Kcl 
0.33 mM CaCl2 
0.33 mM MgSO2
</td>
</tr>
<tr>
<td>Microliter Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>80300</td>
<td>701N 10uL SYR (26s/2&#x201D;/2)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

retro-orbital injection in adult zebrafish

Tratamento medicamentoso de animais inteiros é uma ferramenta essencial em qualquer sistema modelo para farmacológicos e químicos estudos genéticos. Injecção intravenosa (IV) é muitas vezes a forma mais eficaz e não invasivo de transporte de um agente de interesse. No peixe-zebra (<em&gt; Danio rerio</em&gt;), IV injeção de drogas tem sido um desafio, porque o diâmetro dos pequenos vasos. Esta também se mostrou um obstáculo significativo para a injeção de células durante o transplante de células-tronco hematopoética. Historicamente, as injeções para a corrente sanguínea foram feitas diretamente através do coração. No entanto, este procedimento intra-cardíaca tem uma taxa de mortalidade muito elevada como o coração é freqüentemente furado durante a injeção de deixar o peixe propensos à infecção perda de sangue, maciça ou lesão de órgão fatal. Com base na nossa experiência com o mouse, temos desenvolvido um procedimento de injeção novo no zebrafish em que o local da injeção é atrás do olho e no seio venoso retro-orbital. Este retro-orbital técnica de injeção (RO) tem sido empregada com sucesso em ambos injeção de drogas nos peixes adultos, bem como o transplante de células da medula todo rim. Injeção RO tem uma taxa de mortalidade muito menor do que a injeção intra-cardíaca tradicional. Peixes que são injetados retro-orbital tendem a sangrar a injeção menos seguinte e estão em um risco muito menor de lesão de um órgão importante como o coração. Células Além disso, quando realizado adequadamente, injetado e / ou drogas entrar rapidamente na corrente sangüínea permitindo compostos para exercer seu efeito sobre o peixe inteiro e células de rim facilmente o lar de seu nicho. Assim, esta técnica minimiza nova injeção de mortalidade, permitindo a entrega eficiente de material para a corrente sanguínea de peixes adultos. Aqui nós exemplificar essa técnica, retro-orbital injeção de Tg (<em&gt; Globina</em&gt;: GFP) em células adultas<em&gt; Casper</em&gt; Peixes, bem como a injeção de um corante fluorescente vermelho (dextran, Texas Red<em&gt;</em&gt;) Em adultos<em&gt; Casper</emPeixe&gt;. Em seguida, visualize injeções de sucesso por microscopia de fluorescência toda animais.

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Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Aqui nós mostramos como fazer retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto.

Retro-orbital de injeção no Zebrafish Adulto

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Transplante de Medula Renal inteiro em Zebrafish Adulto

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Biologia

Zebrafish Brain Ventricle Injection

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Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

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Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Injeção intraperitoneal em Zebrafish Adulto

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Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Dissecção do coração em larval, Zebrafish Juvenil e Adulto, Danio rerio</em

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In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Em Eletroporação vivo de Morpholinos na Retina Zebrafish Adulto

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

Na eletroporação in vivo de Morpholinos no Adulto Regeneração Zebrafish Cauda Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

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The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

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Gavaging Zebrafish Adulto

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...