Name: retro-orbital injection in adult zebrafish
Uploaded: 2009-12-07T18:43:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish at JoVE.com

Detta arbete stöds av Howard Hughes Medical Institute och ett bidrag från NIH för studiet av embryonala blodbildningen.

Del 1. Beredning av injektion material <ol><li> Tg (globin: GFP) celler: </li><li> Utfallande vuxen donator fiska med 10ul pipettspetsen överdragna med heparin (1unit/ul) för att punktera fisk bakom Gill. </li><li> Aspirera röda blodkroppar och fördela i cell buffert (0.9x PBS + 5% FBS + 1% Penna / Strep). </li><li> Filtrera cellsuspension över 40uM mesh och bestämma koncentrationen av celler genom att använda hemocytometer som tidigare beskrivits av LeBlanc et al. </li><li> Spinn ner och återsuspende...

<ol>
	<li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+route+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model.">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab Animal. 37, 26-32 (2008).</li><li>Pinkerton, W., Webber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+injecting+small+laboratory+animals+by+the+ophthalmic+plexus+route.">A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route.</a> Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).</li><li>White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish.">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li></ol>

Retro-orbital injektionsvätska till vuxna zebrafisk ger den högsta effektiviteten i leveransen av injicerade materialet till blodomloppet med den lägsta förekomsten av dödlighet. På grund av arten av injektionen plats, verkar punktering att läka snabbt, minska förekomsten av infektioner och mängden blod förlust. Webbplatsen kan även vara flera gånger injiceras under en kort tid för dagliga injektioner av läkemedel, till exempel. Stora mängder narkotika måste köpas för tradi...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>2106</td>
<td>Preweighed vial of 300 USP units</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine-S</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Western Chemical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MS-222</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran, Texas Red&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>D1830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>5mM NaCl 
0.17 mM Kcl 
0.33 mM CaCl2 
0.33 mM MgSO2
</td>
</tr>
<tr>
<td>Microliter Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>80300</td>
<td>701N 10uL SYR (26s/2&#x201D;/2)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

retro-orbital injection in adult zebrafish

Läkemedelsbehandling av hela djur är ett viktigt verktyg i alla modellsystem för farmakologiska och kemiska genetiska studier. Intravenös (IV) injektion är ofta den mest effektiva och icke-invasiv form av leverans av en agent av intresse. I zebrafisk (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Har IV injektion av läkemedel har länge varit en utmaning på grund av det lilla fartyget diameter. Detta har också visat en betydande hinder för injektion av celler under hematopoetisk stamcellstransplantation. Historiskt sett var injektioner i blodet sker direkt genom hjärtat. Detta har dock Intrakardiella förfarande en mycket hög dödlighet som hjärtat är ofta punkteras under injektion lämnar fisken utsatta för infektion, massiv blodförlust eller dödliga organskador. Ritning på vår erfarenhet med musen, har vi utvecklat en ny injektion förfarande i zebrafisk där injektionsstället är bakom ögat och in i retro-orbital venösa sinus. Denna retro-orbital (RO) injektionsteknik har framgångsrikt används i både injektion av läkemedel i vuxen fisk samt transplantation av hela celler njure märg. RO injektion har en mycket lägre dödlighet än traditionella Intrakardiella injektion. Fisk som injiceras retro-orbitally blöder mindre efter injektion och är på en mycket lägre risk för skada på ett huvudsakligt organ som hjärta. Vidare när de utförs på rätt sätt, injiceras celler och / eller narkotika in snabbt i blodomloppet så att föreningar att utöva sin effekt på hel fisk och celler njure enkelt hem till sin nisch. Därmed minimerar denna nya injektionsteknik mortalitet samtidigt som effektiv leverans av material i blodet av vuxen fisk. Här har vi exempel på denna teknik med retro-orbital injektion av Tg (<em&gt; Globin</em&gt;: GFP) celler i vuxen<em&gt; Casper</em&gt; Fisk samt injektion av en röd fluorescerande färg (dextran, Texas Red<em&gt;</em&gt;) I vuxen<em&gt; Casper</em&gt; Fisk. Vi visualiserar då framgångsrika injektioner av hela djuret fluorescensmikroskopi.

Watch this Scientific Journal Video about Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish at JoVE.com

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Här visar vi hur du gör retro-orbital injektionsvätska till vuxna zebrafisk.

Retro-orbital injektionsvätska till vuxna Zebrafish

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Transplantation av hela Njure Marrow i vuxen Zebrafish

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Zebrafish Brain Ventricle Injection

Zebrafisk Brain kammare Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Dissektion av organ från vuxna Zebrafish

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Intraperitoneal injektion i vuxen Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Dissekering av vuxna Zebrafish Kidney

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Hjärta Dissection i Larvernas, unga och vuxna Zebrafish, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Elektroporering av Morpholinos i Regenerating Adult Zebrafish stjärtfenan

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

Blodinsamling för biokemisk analys i vuxen Zebrafish

The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging vuxna zebrafisk

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...