Name: live dissection of drosophila embryos: streamlined methods for screening mutant collections by antibody staining
Uploaded: 2009-12-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining at JoVE.com

우리는이 프로토콜을 개발하기 위해 공헌 니키 폭스 Aloisia 슈미트 감사드립니다. 이 작품은 KZ, NS28182하는 NIH RO1 부여에 의해 지원되었다.

소개 배아 발달의 단계 14 17 사이의 Drosophila의 배아는 쉽게 &quot;등심&quot;준비를 생성하기 위해 해부를하실 수 있습니다. 이러한 준비에는 중추 신경계 (CNS)는 중앙을 실행하고, 신체 벽 둘러싸인 있습니다. 창자가 제거됩니다. 준비와 사이에 개입에는 조직이 없기 때문에 항체 물들일 때, 필레는 전체 마운트 배아보다 CNS 및 신체 벽 구조 (예 : 모터 axons, 근육, 말?...

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	<li>Patel, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+and+other+cell+types+in+whole-mount+Drosophila+embryos+and+larvae+using+antibody+probes.">Imaging neuronal subsets and other cell types in whole-mount Drosophila embryos and larvae using antibody probes.</a> Methods Cell Biol. 44, 445-487 (1994).</li><li>Desai, C. J., Gindhart, J. G., Goldstein, L. S., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+tyrosine+phosphatases+are+required+for+motor+axon+guidance+in+the+Drosophila+embryo.">Receptor tyrosine phosphatases are required for motor axon guidance in the Drosophila embryo.</a> Cell. 84, 599-609 (1996).</li><li>Sun, Q., Schindelholz, B., Knirr, M., Schmid, A., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+genetic+interactions+among+four+receptor+tyrosine+phosphatases+regulate+axon+guidance+in+Drosophila.">Complex genetic interactions among four receptor tyrosine phosphatases regulate axon guidance in Drosophila.</a> Molecular and cellular neurosciences. 17, 274-291 (2001).</li><li>Schmid, A., Schindelholz, B., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+RNAi:+a+method+for+evaluating+the+functions+of+gene+families+in+Drosophila.">Combinatorial RNAi: a method for evaluating the functions of gene families in Drosophila.</a> Trends in neurosciences. 25, 71-74 (2002).</li><li>Fox, A. N., Zinn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heparan+sulfate+proteoglycan+syndecan+is+an+in+vivo+ligand+for+the+Drosophila+LAR+receptor+tyrosine+phosphatase.">The heparan sulfate proteoglycan syndecan is an in vivo ligand for the Drosophila LAR receptor tyrosine phosphatase.</a> Curr Biol. 15, 1701-1711 (2005).</li></ol>

우리는이 비디오 데모들은 지금 즉시 Drosophila 유전 발생학의 경험을 가진 사람에 의해 실행될 수있는 자료에 대해 충분하고 자세하게 사는 배아 해부와 얼룩을위한 방법을 표시했다 바랍니다. 물론, 상당한 연습은 여전히​​ 주로 해부 자신을 위해 필요합니다. 우리의 경험에서 라이브 절개 방법을 배우는 모든 사람이 그 / 그녀가 가장 빠르게 고품질의 못하였 느니라 해부를 생성할 수 ?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Borosilicate Tubing With Filament </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>BF120-60-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Narishige model PC-10 needle puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tubes pulled using a heater level of 58.9</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

live dissection of drosophila embryos: streamlined methods for screening mutant collections by antibody staining

배아 발달의 단계 14 17 사이의 Drosophila의 배아는 쉽게 &quot;등심&quot;준비를 생성하기 위해 해부를하실 수 있습니다. 이러한 준비에서, 중추 신경 시스템은 중앙을 실행하고, 신체 벽 둘러싸인 있습니다. 여러 phenotypes는 그러한 준비를 사용하여 검사하고 있습니다. 대부분의 경우 필레는 항체 묻은 고정 전체 마운트 배아의 절개로 생성되었습니다. 이러한 &quot;고정 해부는&quot;그러나 일부 단점이 있습니다. 그들은 실행 시간이 소비되며,이 변이는 GFP 밸런서 염색체 이상 유지하는 주식에서 돌연변이 (GFP - 음수) 배아를 정렬하기가 어렵습니다. 2002 년부터, 우리 그룹은 고아 수용체에 대한 리간드를 식별 결핍 및 이소성 표현 화면을 실시하고 있습니다. 이 작업을 수행하기 위해서는, 우리가 사는 배아 해부하고 균형잡힌 라인의 수백을 포함하는 컬렉션의 항체 염색법에 대한 능률 프로토콜을 개발했습니다. 우리는 고정 절개로보다 라이브 절개로 주식의 대규모 컬렉션에 phenotypes을 검토하기 위해 상당히 더 효율적이라고 결론을 내렸다있다. 프로토콜 여기에서 설명한을 사용하여, 하나의 훈련 개인은 복합 현미경으로 각 라인 4-7 돌연변이 배아를 조사 phenotypes에 대해 하루에 10 라인까지 스크린 수 있습니다. 이렇게하면 한 줄에 최대 70 hemisegments가 40X 물 침지 렌즈 높은 배율의 점수이기 때문에 미묘한, 낮은 penetrance phenotypes를 부여 변이의 식별.

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Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining (Video) | JoVE

우리는 특정 genotypes의 Drosophila의 배아의 &quot;등심&quot;준비 창출을위한 능률적인 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 유전자 화면의 다양한 효율적인 실행을 허용합니다. 또한 후반 배아의 구조 우수 시각화 수 있습니다.

라이브 해부 Drosophila 태아 : 항체 스테 이닝에 의해 돌연변이 컬렉션을 검사 늘씬한 방법

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Research

JoVE Journal

Biology

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

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연구

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