Name: measuring plasma membrane protein endocytic rates by reversible biotinylation
Uploaded: 2009-12-23T16:00:00
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यह काम NIH अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था # DA15169 हेम

प्रक्रिया अवलोकन: इस दृष्टिकोण का प्रयोग, कोशिका की सतह प्रोटीन covalently उपलब्ध कोशिकी लाइसिन अवशेषों पर तस्करी प्रतिबंधक शर्तें (यानी कम तापमान) के तहत एक झिल्ली impermeant, डाइसल्फ़ाइड युग्मित biotinylation ?...

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	<li>Holton, K. L., Loder, M. K., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonclassical+distinct+endocytic+signals+dictate+constitutive+and+PKC-regulated+neurotransmitter+transporter+internalization.">Nonclassical distinct endocytic signals dictate constitutive and PKC-regulated neurotransmitter transporter internalization.</a> Nat Neurosci. 8, 881-888 (2005).</li><li>Boudanova, E., Navaroli, D. M., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine-induced+decreases+in+dopamine+transporter+surface+expression+are+protein+kinase+C-independent.">Amphetamine-induced decreases in dopamine transporter surface expression are protein kinase C-independent.</a> Neuropharmacology. 54, 605-612 (2008).</li><li>Boudanova, E., Navaroli, D. M., Stevens, Z., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+transporter+endocytic+determinants:+carboxy+terminal+residues+critical+for+basal+and+PKC-stimulated+internalization.">Dopamine transporter endocytic determinants: carboxy terminal residues critical for basal and PKC-stimulated internalization.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 211-217 (2008).</li><li>Loder, M. K., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dopamine+transporter+constitutively+internalizes+and+recycles+in+a+protein+kinase+C-regulated+manner+in+stably+transfected+PC12+cell+lines.">The dopamine transporter constitutively internalizes and recycles in a protein kinase C-regulated manner in stably transfected PC12 cell lines.</a> J Biol Chem. 278, 22168-22174 (2003).</li></ol>

आम समस्याओं: सबसे आम समस्या यह है कि इन प्रयोगों में उठता गरीब पट्टी क्षमता है. पट्टी की दक्षता में परिणामों की व्याख्या करने में सक्षम किया जा रहा में महत्वपूर्ण है. जब तक पट्टी अत्यधिक कुशल था, यह नि?...

measuring plasma membrane protein endocytic rates by reversible biotinylation

प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन रिसेप्टर्स, आयन चैनल, ट्रांसपोर्टरों और पंप शामिल प्रोटीन के एक बड़े, विविध समूह हैं. इन प्रोटीनों की गतिविधि पोषक तत्व प्रसव, सेलुलर excitability, और रासायनिक संकेतन सहित प्रमुख सेलुलर घटनाओं की एक किस्म के लिए जिम्मेदार है. कई प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन गतिशील endocytic तस्करी, जो प्रोटीन सतह अभिव्यक्ति फेरबदल करके प्रोटीन समारोह modulates द्वारा विनियमित रहे हैं. तंत्र है कि प्रोटीन endocytosis की सुविधा जटिल हैं और कई झिल्ली प्रोटीन के लिए पूरी तरह समझ नहीं है. आदेश में पूरी तरह से तंत्र है कि किसी दिए गए प्रोटीन के endocytic तस्करी नियंत्रण को समझने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि प्रोटीन endocytic दर ठीक मापा जा. कई रिसेप्टर्स के लिए, प्रत्यक्ष endocytic दर माप अक्सर लेबल रिसेप्टर ligands उपयोग से प्राप्त कर रहे हैं. हालांकि, ट्रांसपोर्टरों, पंप और आयन चैनल के रूप में झिल्ली प्रोटीन के कई कक्षाओं के लिए, वहाँ कोई सुविधाजनक ligand है कि endocytic दर को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वर्तमान रिपोर्ट में, हम एक पलटवाँ biotinylation विधि है कि हम डोपामाइन (DAT) ट्रांसपोर्टर endocytic दर को मापने के रोजगार का वर्णन. इस विधि internalization दरों को मापने के लिए एक सीधा दृष्टिकोण प्रदान करता है, और आसानी से सबसे झिल्ली प्रोटीन की तस्करी के अध्ययन के लिए नियोजित कर सकते हैं.

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Measuring Plasma Membrane Protein Endocytic Rates by Reversible Biotinylation

नियमित endocytosis कोशिका की सतह झिल्ली प्रोटीन के बहुमत की अभिव्यक्ति के स्तर को नियंत्रित करता है. यहाँ हम कम करने योग्य, झिल्ली impermeant biotinylation dopamine ट्रांसपोर्टर (DAT), एक polytopic झिल्ली प्रोटीन के endocytic दर को मापने के अभिकर्मकों का उपयोग. विधि सबसे प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन के endocytic दर को मापने के लिए एक सीधा दृष्टिकोण की सुविधा.

प्रतिवर्ती Biotinylation द्वारा प्लाज्मा झिल्ली प्रोटीन Endocytic दरें माप

Plasma membrane proteins are a large, diverse group of proteins comprised of receptors, ion channels, transporters and pumps.  Activity of these proteins ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

प्लाज्मा और astrocytes में झिल्ली ग्लोबल intracellular कैल्शियम गतिशीलता के पास माप

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Measuring the Induced Membrane Voltage with Di-8-ANEPPS

डि-8-ANEPPS के साथ प्रेरित झिल्ली वोल्ट माप

Placement of a cell into an external electric field causes a local charge redistribution inside and outside of the cell in the vicinity of the cell ...

Quantitative Measurement of GLUT4 Translocation to the Plasma Membrane by Flow Cytometry

GLUT4 स्थानान्तरण के मात्रात्मक प्रवाह cytometry द्वारा प्लाज्मा झिल्ली मापन

Glucose is the main source of energy for the body, requiring constant regulation of its blood concentration. Insulin release by the pancreas induces ...

Mapping Molecular Diffusion in the Plasma Membrane by Multiple-Target Tracing (MTT)

Mapping Molecular Diffusion in the Plasma Membrane by Multiple-Target Tracing MTT

प्लाज्मा झिल्ली में एकाधिक लक्ष्य अनुरेखण (MTT) द्वारा आण्विक प्रसार मानचित्रण

Our goal is to obtain a comprehensive description of molecular processes occurring at cellular membranes in different biological functions. We aim at ...

Harvesting and Cryo-cooling Crystals of Membrane Proteins Grown in Lipidic Mesophases for Structure Determination by Macromolecular Crystallography

झिल्ली macromolecular क्रिस्टलोग्राफी द्वारा संरचना निर्धारण के लिए lipidic Mesophases में बढ़ी प्रोटीन की कटाई और क्रायो ठंडा कण

An important route to understanding how proteins function at a mechanistic level is to have the structure of the target protein available, ideally at ...

Real-time Analyses of Retinol Transport by the Membrane Receptor of Plasma Retinol Binding Protein

प्लाज्मा Retinol बाइंडिंग प्रोटीन की झिल्ली रिसेप्टर द्वारा वास्तविक समय Retinol परिवहन का विश्लेषण

Vitamin A is essential for vision and the growth/differentiation of almost all human organs.  Plasma retinol binding protein (RBP) is the principle and ...

Imaging Plasma Membrane Deformations With pTIRFM

PTIRFM साथ इमेजिंग प्लाज्मा झिल्ली विरुपणों

To gain novel insights into the dynamics of exocytosis, our group focuses on the changes in lipid bilayer shape that must be precisely regulated during ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

झिल्ली प्रोटीन की हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन आधारित अभिव्यक्ति स्क्रीनिंग में<em&gt; Escherichia कोलाई</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

Membrane Transport Processes Analyzed by a Highly Parallel Nanopore Chip System at Single Protein Resolution

झिल्ली परिवहन एकल प्रोटीन संकल्प पर एक अत्यधिक समानांतर nanopore चिप सिस्टम द्वारा विश्लेषण प्रक्रियाओं

Membrane protein transport on the single protein level still evades detailed analysis, if the substrate translocated is non-electrogenic. Considerable ...

Determination of Plasma Membrane Partitioning for Peripherally-associated Proteins

परिधीय रूप से जुड़े प्रोटीन के लिए प्लाज्मा झिल्ली विभाजन का निर्धारण

This method provides a fast approach for the determination of plasma membrane partitioning of any fluorescently-tagged peripherally-associated protein ...