Name: presynaptically silent synapses studied with light microscopy
Uploaded: 2010-01-04T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Presynaptically Silent Synapses Studied with Light Microscopy at JoVE.com

Diese Arbeit wurde vom NIH gewährt DA018109 und MH78823 und NIH Neuroscience Blueprint Core-Stipendium P30NS057105 zu Washington University unterstützt.

Kultur Vorbereitung <ol><li> Bereiten dissoziierten Zellkulturen von Ratte oder Maus Hippocampus-Zellen aus postnatalen Tag 0 bis 3 Tiere 1. Unsere Neuronen auf eine zugrunde liegende Astrozyten Monoschicht, was wiederum hält sich an ein Kollagen-Schicht auf eine Zahl 0 Dicke Deckglas ausgebreitet halten. Platte der Neuronen bei einer Dichte von etwa 500 Zellen pro Quadratzentimeter. </li><li> Lassen Sie die Kulturen für 10-14 Tage wachsen, um synaptische Entwicklung und Reifung zu ermöglichen. Behandeln...

<ol>
	<li>Mennerick, S., Que, J., Benz, A., Zorumski, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+and+synaptic+properties+of+hippocampal+neurons+grown+in+microcultures+and+in+mass+cultures.">Passive and synaptic properties of hippocampal neurons grown in microcultures and in mass cultures.</a> J. Neurophysiol. 73, 320-332 (1995).</li><li>Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Olney, J. W., Mennerick, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+activity+depresses+synaptic+function+through+an+effect+on+vesicle+priming.">Physiological activity depresses synaptic function through an effect on vesicle priming.</a> J. Neurosci. 26, 6618-6626 (2006).</li><li>Moulder, K. L., Jiang, X., Chang, C., Taylor, A. A., Benz, A. M., Conti, A. C., Muglia, L. J., Mennerick, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specific+role+for+Ca2+-dependent+adenylyl+cyclases+in+recovery+from+adaptive+presynaptic+silencing.">A specific role for Ca2+-dependent adenylyl cyclases in recovery from adaptive presynaptic silencing.</a> J. Neurosci. 28, 5159-5168 (2008).</li><li>Sara, Y., Mozhayeva, M. G., Liu, X., Kavalali, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+vesicle+recycling+supports+neurotransmission+during+sustained+stimulation+at+hippocampal+synapses.">Fast vesicle recycling supports neurotransmission during sustained stimulation at hippocampal synapses.</a> J. Neurosci. 22, 1608-1617 (2002).</li><li>Kay, A. R., Alfonso, A., Alford, S., Cline, H. T., Holgado, A. M., Sakmann, B., Snitsarev, V. A., Stricker, T. P., Takahashi, M., Wu, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+synaptic+activity+in+intact+brain+and+slices+with+FM1-43+in+C.+elegans,+lamprey,+and+rat.">Imaging synaptic activity in intact brain and slices with FM1-43 in C. elegans, lamprey, and rat.</a> Neuron. 24, 809-817 (1999).</li><li>Rosenmund, C., Sigler, A., Augustin, I., Reim, K., Brose, N., Rhee, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+control+of+vesicle+priming+and+short-term+plasticity+by+Munc13+isoforms.">Differential control of vesicle priming and short-term plasticity by Munc13 isoforms.</a> Neuron. 33, 411-424 (2002).</li><li>Altrock, W. D., tom Dieck, S., Sokolov, M., Meyer, A. C., Sigler, A., Brakebusch, C., Fassler, R., Richter, K., Boeckers, T. M., Potschka, H., Brandt, C., Loscher, W., Grimberg, D., Dresbach, T., Hempelmann, A., Hassan, H., Balschun, D., Frey, J. U., Brandstatter, J. H., Garner, C. C., Rosenmund, C., Gundelfinger, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+inactivation+of+a+fraction+of+excitatory+synapses+in+mice+deficient+for+the+active+zone+protein+bassoon.">Functional inactivation of a fraction of excitatory synapses in mice deficient for the active zone protein bassoon.</a> Neuron. 37, 787-800 (2003).</li><li>Ting, J. T., Kelley, B. G., Lambert, T. J., Cook, D. G., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+precursor+protein+overexpression+depresses+excitatory+transmission+through+both+presynaptic+and+postsynaptic+mechanisms.">Amyloid precursor protein overexpression depresses excitatory transmission through both presynaptic and postsynaptic mechanisms.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 353-348 (2007).</li></ol>

Bedeutung <ol><li> Typischerweise Synapsen wird angenommen, dass durch die Freigabe Sender mit einem messbaren Wahrscheinlichkeit zu betreiben. Die Arbeit von uns selbst und andere macht es offensichtlich, dass einige Synapsen refraktär Freisetzung von Neurotransmittern sind, trotz einer vollständigen Ergänzung der vesikulären Neurotransmitter-Transporter und andere wichtige präsynaptischen Marker 2, 6-8. Wir haben bereits, dass die basalen Netzwerk-Aktivität in Neuronen entscheidend für diese Bevöl...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>FM1-43FX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-35355</td>
<td>A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing.</td>
</tr>
<tr>
<td>Advasep-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CyDex</td>
<td>AR-0A7-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>vGluT-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>AB5905</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa 647-conjugated anti-GP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-21450</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluoromount-G</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Southern Biotechnology Associates</td>
<td>0100-01</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

presynaptically silent synapses studied with light microscopy

Synaptische Plastizität wahrscheinlich liegt dem Nervensystem die Fähigkeit zu lernen und zu erinnern und auch stellen eine Anpassungsfähigkeit, die sonst verhindert eine Beschädigung Beleidigungen zu neurotoxischen. Wir haben das Studium eine Form der präsynaptischen Plastizität, die interessante Teil ist, weil es als digitale Ein-und Ausschalten eines präsynaptischen Terminal s Fähigkeit, Vesikel mit dem Neurotransmitter Glutamat-Ausschüttung zum Ausdruck kommt. Hier zeigen wir ein Protokoll für die Visualisierung der Aktivität Status der präsynaptischen in dissoziierten Zellkulturen aus dem Hippocampus Nagetier vorbereitet. Die Methode beruht auf der Erfassung aktiven Synapsen mit Färbung mit einem fixierbaren Form der Styryl-Farbstoff FM1-43, häufig verwendet, um synaptische Vesikel-Label. Diese Färbung Profil ist mit Immunfärbung des gleichen Terminals mit einem Antikörper gegen den vesikulären Glutamat-Transporter 1 (vGluT-1), eine Kennzeichnungspflicht aller Glutamat Synapsen unabhängig von Aktivierungsstatus konzipiert Fleck gerichtet verglichen. Wir finden, dass depolarisierende Stimuli präsynaptischen Schweigen zu induzieren. Die Bevölkerung von Synapsen, die still ist unter Baseline-Bedingungen können bei längerer elektrischen Schweigen oder durch Aktivierung des cAMP-Signalwege aktiviert werden.

Watch this Scientific Journal Video about Presynaptically Silent Synapses Studied with Light Microscopy at JoVE.com

Presynaptically Silent Synapses Studied with Light Microscopy

Glutamatergen Synapsen kann von einem aktiven Modus, um einen Silent-Modus wechseln. Wir zeigen, dass präsynaptische Aktivität Status in dissoziierten Kultur der Nager Neuronen visualisiert mit einem fixierbaren Form des FM1-43 Farbstoff aktiven Synapsen visualisieren und Immunfärbung mit vGluT-1-Antikörper, um alle Glutamat Synapsen zu visualisieren.

Präsynaptisch Stille Synapsen mit Lichtmikroskopie Studium

Synaptic plasticity likely underlies the nervous system's ability to learn and remember and may also represent an adaptability that prevents otherwise ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Vorbereitung der Drosophila S2-Zellen für Lichtmikroskopie

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Forschung

Biologie

Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy

Live Cell Reaktion auf mechanische Stimulation von Integrated Optical und Atomic Force Microscopy Studium

To understand the mechanism by which living cells sense mechanical forces, and how they respond and adapt to their environment, a new technology able to ...

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading (TED)

Direct Imaging of ER Calcium with Targeted-Esterase Induced Dye Loading TED

Direct Imaging von Calcium ER mit Targeted-Esterase Induzierte Dye Loading (TED)

Visualization of calcium dynamics is important to understand the role of calcium in cell physiology. To examine calcium dynamics, synthetic fluorescent ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Prüfung der<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven Tracheal Terminal-Cells durch Lichtmikroskopie

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish

Multilayer-Halterung für Langzeit-Licht-Mikroskopie Blatt der Zebrafisch

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Klonale Verfolgung von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen durch Fünf Fluoreszierende Proteine ​​mit Hilfe der konfokalen und Multiphotonen Mikroskopie Markierte

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Analysis of the Gap Junction-dependent Transfer of miRNA with 3D-FRAP Microscopy

Analyse der Gap-Junction-abhängigen Übertragung von miRNA mit 3D-FRAP-Mikroskopie

Small antisense RNAs, like miRNA and siRNA, play an important role in cellular physiology and pathology and, moreover, can be used as therapeutic agents ...

Light Sheet Microscopy of Fast Cardiac Dynamics in Zebrafish Embryos

Lichtblattmikroskopie der schnellen Herzdynamik in Zebrafischembryonen

Embryonic cardiac research has greatly benefited from advances in fast in vivo light sheet fluorescence microscopy (LSFM). Combined with the rapid ...

Quantitative Analysis of Aspergillus nidulans Growth Rate using Live Microscopy and Open-Source Software

Quantitative Analysis of Aspergillus nidulans Growth Rate using Live Microscopy and Open-Source Software

Quantitative Analyse der Wachstumsrate von Aspergillus nidulans mittels Live-Mikroskopie und Open-Source-Software

It is well established that colony growth of filamentous fungi, mostly dependent on changes in hyphae/mycelia apical growth rate, is macroscopically ...