Name: presynaptically silent synapses studied with light microscopy
Uploaded: 2010-01-04T17:00:00
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Este trabalho foi financiado pelo NIH concede DA018109 e MH78823 e Neuroscience NIH Grant Blueprint Núcleo P30NS057105 para Washington University.

Preparação cultura <ol><li> Prepare culturas de células dissociadas de ratazana ou rato de células do hipocampo dia pós-natal 0-3 animais 1. Nossos neurônios aderir a uma monocamada subjacente astrócitos, que por sua vez, adere a uma camada de colágeno espalhados em uma lamela espessura número 0. Placa de neurônios a uma densidade de cerca de 500 células por centímetro quadrado. </li><li> Permitir que as culturas a crescer por 10-14 dias para permitir o desenvolvimento e maturação sináptica. ...

<ol>
	<li>Mennerick, S., Que, J., Benz, A., Zorumski, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+and+synaptic+properties+of+hippocampal+neurons+grown+in+microcultures+and+in+mass+cultures.">Passive and synaptic properties of hippocampal neurons grown in microcultures and in mass cultures.</a> J. Neurophysiol. 73, 320-332 (1995).</li><li>Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Olney, J. W., Mennerick, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+activity+depresses+synaptic+function+through+an+effect+on+vesicle+priming.">Physiological activity depresses synaptic function through an effect on vesicle priming.</a> J. Neurosci. 26, 6618-6626 (2006).</li><li>Moulder, K. L., Jiang, X., Chang, C., Taylor, A. A., Benz, A. M., Conti, A. C., Muglia, L. J., Mennerick, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specific+role+for+Ca2+-dependent+adenylyl+cyclases+in+recovery+from+adaptive+presynaptic+silencing.">A specific role for Ca2+-dependent adenylyl cyclases in recovery from adaptive presynaptic silencing.</a> J. Neurosci. 28, 5159-5168 (2008).</li><li>Sara, Y., Mozhayeva, M. G., Liu, X., Kavalali, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+vesicle+recycling+supports+neurotransmission+during+sustained+stimulation+at+hippocampal+synapses.">Fast vesicle recycling supports neurotransmission during sustained stimulation at hippocampal synapses.</a> J. Neurosci. 22, 1608-1617 (2002).</li><li>Kay, A. R., Alfonso, A., Alford, S., Cline, H. T., Holgado, A. M., Sakmann, B., Snitsarev, V. A., Stricker, T. P., Takahashi, M., Wu, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+synaptic+activity+in+intact+brain+and+slices+with+FM1-43+in+C.+elegans,+lamprey,+and+rat.">Imaging synaptic activity in intact brain and slices with FM1-43 in C. elegans, lamprey, and rat.</a> Neuron. 24, 809-817 (1999).</li><li>Rosenmund, C., Sigler, A., Augustin, I., Reim, K., Brose, N., Rhee, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+control+of+vesicle+priming+and+short-term+plasticity+by+Munc13+isoforms.">Differential control of vesicle priming and short-term plasticity by Munc13 isoforms.</a> Neuron. 33, 411-424 (2002).</li><li>Altrock, W. D., tom Dieck, S., Sokolov, M., Meyer, A. C., Sigler, A., Brakebusch, C., Fassler, R., Richter, K., Boeckers, T. M., Potschka, H., Brandt, C., Loscher, W., Grimberg, D., Dresbach, T., Hempelmann, A., Hassan, H., Balschun, D., Frey, J. U., Brandstatter, J. H., Garner, C. C., Rosenmund, C., Gundelfinger, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+inactivation+of+a+fraction+of+excitatory+synapses+in+mice+deficient+for+the+active+zone+protein+bassoon.">Functional inactivation of a fraction of excitatory synapses in mice deficient for the active zone protein bassoon.</a> Neuron. 37, 787-800 (2003).</li><li>Ting, J. T., Kelley, B. G., Lambert, T. J., Cook, D. G., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+precursor+protein+overexpression+depresses+excitatory+transmission+through+both+presynaptic+and+postsynaptic+mechanisms.">Amyloid precursor protein overexpression depresses excitatory transmission through both presynaptic and postsynaptic mechanisms.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 353-348 (2007).</li></ol>

Significado <ol><li> Normalmente as sinapses são pensadas para operar liberando transmissor com uma probabilidade mensurável. Trabalho por nós e os outros torna evidente que algumas sinapses são refratários à liberação de neurotransmissores, apesar de um conjunto completo do transportador do neurotransmissor vesicular e de outros importantes marcadores pré-sináptica 2, 6-8. Nós temos mostrado previamente que a atividade de rede basal em neurônios é fundamental para manter essa população de si...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>FM1-43FX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>F-35355</td>
<td>A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing.</td>
</tr>
<tr>
<td>Advasep-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>CyDex</td>
<td>AR-0A7-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>vGluT-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>AB5905</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa 647-conjugated anti-GP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-21450</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluoromount-G</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Southern Biotechnology Associates</td>
<td>0100-01</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

presynaptically silent synapses studied with light microscopy

Synaptic subjaz plasticidade provável capacidade do sistema nervoso de aprender e lembrar e também pode representar uma capacidade de adaptação que impede que outra forma de tornar-se prejudicial insultos neurotóxicos. Temos vindo a estudar uma forma de plasticidade pré-sináptico que é interessante em parte porque ele é expresso como uma comutação digital dentro e fora da capacidade de um terminal pré-sináptico s para liberar vesículas contendo o neurotransmissor glutamato. Aqui demonstramos um protocolo para a visualização do status da atividade de terminais pré-sinápticos em culturas de células dissociadas preparadas do hipocampo de roedores. O método baseia-se na detecção de sinapses ativas usando coloração com uma forma fixable do corante styryl FM1-43, comumente usado para rotular vesículas sinápticas. Este perfil coloração é comparado com imunomarcação dos terminais mesmo com um anticorpo dirigido contra o transportador de glutamato vesicular 1 (vGluT-1), uma mancha projetado para rotular todas as sinapses de glutamato, independentemente do status da ativação. Nós encontramos que os estímulos despolarizantes induzir silenciamento pré-sináptica. A população de sinapses que é silencioso em condições de linha de base pode ser ativado por silenciar elétrica prolongada ou por ativação de vias de sinalização cAMP.

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Presynaptically Silent Synapses Studied with Light Microscopy

Sinapses glutamatérgicas pode mudar de um modo ativo de um modo silencioso. Nós demonstramos que o status de atividade pré-sináptica da cultura dissociada dos neurônios dos roedores é visualizado através de um formulário fixable do FM1-43 corante para visualizar sinapses ativas e imunocoloração com vGluT-1 anticorpos para visualizar todas as sinapses de glutamato.

Sinapses pré-sináptico Silencioso Estudou com Microscopia de Luz

Synaptic plasticity likely underlies the nervous system's ability to learn and remember and may also represent an adaptability that prevents otherwise ...

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