Name: single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors
Uploaded: 2010-01-05T20:00:00
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Soutenu par le Prix de développement de carrière à partir de la recherche pour prévenir la cécité, NIH EY 019 312, et subvention sans restriction de la recherche pour prévenir la cécité et EY 02687 (Département d&#39;ophtalmologie et de sciences visuelles à l&#39;Université Washington).

Faire électrodes <ol><li> Faire les électrodes d&#39;enregistrement à l&#39;aide d&#39;un tire-micropipette et polir les électrodes avec filament chauffant sous le microscope. Pour cône de la souris d&#39;aspiration d&#39;enregistrement unicellulaire, le diamètre intérieur de la pointe de l&#39;électrode est d&#39;environ um 6-7. </li><li> Préparer des électrodes de référence. Peser agar à 1% dans de l&#39;eau distillée. Faire fondre la solution d&#39;agar dans le bain d&#39;eau chaude. Remplissez les pi...

<ol>
	<li>Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+fluctuations+in+membrane+current+of+single+toad+rod+outer+segments.">Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments.</a> Nature. 269, 78-80 (1977).</li><li>Nikonov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptors+of+Nrl+-/-+mice+coexpress+functional+S-+and+M-cone+opsins+having+distinct+inactivation+mechanisms.">Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms.</a> J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).</li><li>Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+features+of+the+S-+and+M-cone+photoreceptors+of+wild-type+mice+from+single-cell+recordings.">Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings.</a> J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).</li><li>Applebury, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+a+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27, 513-523 (2000).</li><li>Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+that+underlie+bleaching+and+background+adaptation.">Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation.</a> J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).</li><li>Calvert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototransduction+in+transgenic+mice+after+targeted+deletion+of+the+rod+transducin+alpha+-subunit.">Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).</li></ol>

L&#39;enregistrement d&#39;aspiration mono-cellulaire de cellules photoréceptrices a été développé il ya 3 décennies. Il nous permet d&#39;enregistrer le changement trans-membranaire courant induit par une stimulation lumineuse sans pénétrer la membrane cellulaire. En raison de haute adhérence cellule-cellule, il est difficile d&#39;isoler saine seule tige et le cône de la rétine de souris, comme la rétine des amphibiens et il est difficile de trouver des cônes individuels en raison de la faible pourcentage...

single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors

Photorécepteurs Rod et cônes dans la rétine sont responsables de la détection de lumière. Dans l&#39;obscurité, des nucléotides cycliques-dépendants (CNG) des canaux dans le segment externe sont ouvertes et permettent aux flux de cations régulièrement vers l&#39;intérieur à travers la membrane, dépolariser la cellule. Exposition à la lumière déclenche la fermeture des canaux CNG, bloque le flux cation courant entrant, et donc les résultats de l&#39;hyperpolarisation cellulaire. Basé sur la polarité des photorécepteurs, une méthode d&#39;enregistrement d&#39;aspiration a été développé en 1970 que, contrairement à la classique technique de patch-clamp, ne nécessite pas de pénétrer la membrane plasmique<sup&gt; 1</sup&gt;. Dessin du segment externe dans une pipette en verre bien ajustés remplis de solution extracellulaire permet d&#39;enregistrer les changements en cours dans des cellules individuelles lors de test-éclair d&#39;exposition. Cependant, ce bien établi &quot;extérieur-segment-in (OS-in)&quot; enregistrement d&#39;aspiration n&#39;est pas adapté pour les enregistrements de cône de la souris, en raison de la faible pourcentage de cônes dans la rétine de souris (3%) et les difficultés à identifier le cône segments externes. Récemment, un segment interne-dans (IS-in) d&#39;enregistrement de configuration a été développé pour tracer le segment intérieur / région nucléaire du photorécepteur dans la pipette d&#39;enregistrement<sup&gt; 2,3</sup&gt;. Dans cette vidéo, nous allons montrer comment enregistrer à partir individuels photoresponses cône de souris à l&#39;aide d&#39;électrodes à aspiration simple cellule.

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Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Nous allons montrer comment enregistrer les réponses flash à partir de cônes de souris en utilisant une électrode de succion.

Enregistrements aspiration simple cellule à partir de cônes photorécepteurs de la souris

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Méthodes pour les enregistrements patch clamp Capacité du calice

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Recherche

Biologie

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

Enregistrements à partir de cellules entières du cerveau d&#39;adulte drosophile

In this video, we demonstrate the procedure for isolating whole brains from adult Drosophila in preparation for recording from single neurons. We begin by ...

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Préparation des suspensions unicellulaires à partir de rate de souris avec le dissociateur gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Préparation standardisée des suspensions unicellulaires provenant de tissus pulmonaires de la souris en utilisant les dissociateur gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Génération d&#39;une seule cellule suspensions de tissus de souris de neurones

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Profilage Single Cell transcriptionnelle des cardiomyocytes de souris adultes

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Génération de souris dérivées de cellules souches pluripotentes induites

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Isolement de cellules endothéliales de la lumière des artères carotides de souris pour des expériences multi-omiques unicellulaires

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Isolation of Nuclei from Flash-Frozen Liver Tissue for Single-Cell Multiomics

Isolement de noyaux de tissu hépatique surgelé pour la multiomique unicellulaire

The liver is a complex and heterogenous tissue responsible for carrying out many critical physiological functions, such as the maintenance of energy ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Préparation de suspension unicellulaire de l’intestin de tilapia du Nil pour séquençage unicellulaire

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...