Name: single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors
Uploaded: 2010-01-05T20:00:00
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Apoyado por el Premio de Desarrollo Profesional de Investigación para Prevención de la Ceguera, NIH EY 019312, y subvención sin restricciones de Investigación para Prevención de la Ceguera y EY 02687 (Departamento de Oftalmología y Ciencias Visuales en la Universidad de Washington).

Hacer electrodos <ol><li> Hacer los electrodos de registro utilizando un extractor de micropipeta y pulir los electrodos con filamento de calefacción bajo el microscopio. Para la grabación del ratón cono de succión de una sola célula, el diámetro interior en la punta del electrodo es de unos 6.7 micras. </li><li> Preparar electrodos de referencia. Pesar 1% de agar en agua destilada. Derretir la solución de agar en un baño de agua caliente. Llenar las pipetas de vidrio (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) con 1% d...

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	<li>Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+fluctuations+in+membrane+current+of+single+toad+rod+outer+segments.">Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments.</a> Nature. 269, 78-80 (1977).</li><li>Nikonov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptors+of+Nrl+-/-+mice+coexpress+functional+S-+and+M-cone+opsins+having+distinct+inactivation+mechanisms.">Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms.</a> J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).</li><li>Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+features+of+the+S-+and+M-cone+photoreceptors+of+wild-type+mice+from+single-cell+recordings.">Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings.</a> J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).</li><li>Applebury, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+a+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27, 513-523 (2000).</li><li>Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+that+underlie+bleaching+and+background+adaptation.">Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation.</a> J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).</li><li>Calvert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototransduction+in+transgenic+mice+after+targeted+deletion+of+the+rod+transducin+alpha+-subunit.">Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).</li></ol>

Una sola célula de grabación de aspiración de las células fotorreceptoras se desarrolló hace 3 décadas. Que nos permite grabar través de la membrana cambio de corriente inducida por la estimulación de la luz, sin penetrar la membrana celular. Debido a la alta adhesión célula-célula, es difícil aislar la barra saludable único y el cono de la retina del ratón, como la retina de anfibios y es difícil de encontrar conos individuales debido al bajo porcentaje (3%) y pequeño tamaño. El segmento de interior-en...

single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors

Fotorreceptores de los bastones y conos en la retina es responsable de la detección de la luz. En la oscuridad, los nucleótidos cíclicos-cerrada (CNG) de canales en el segmento externo están abiertos y permiten el flujo de cationes a ritmo constante hacia el interior a través de la membrana, despolarización de la célula. Exposición a la luz desencadena el cierre de los canales de GNC, bloquea el flujo de cationes corriente de entrada, por lo que resulta en la hiperpolarización de la célula. Con base en la polaridad de los fotorreceptores, un método de grabación de succión se desarrolló en 1970 que, a diferencia de la clásica técnica de patch-clamp, no requiere penetrar en la membrana plasmática<sup&gt; 1</sup&gt;. Dibujar el segmento externo en una pipeta de vidrio bien instalados llena con solución extracelular permite registrar los cambios actuales en las células individuales a la exposición de pruebas flash. Sin embargo, esta bien establecido &quot;exterior del segmento en el (OS-in)&quot; de grabación de succión no es adecuado para las grabaciones de cono del ratón, por el bajo porcentaje de conos en la retina del ratón (3%) y las dificultades para identificar el cono segmentos exteriores. Recientemente, un segmento interno-en (IS-in) de registro de configuración ha sido desarrollado para dibujar el segmento de interior / región nuclear de los fotorreceptores en la pipeta de grabación<sup&gt; 2,3</sup&gt;. En este video, vamos a mostrar cómo grabar desde cada photoresponses ratón cono con una sola célula de electrodos de succión.

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Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Le mostraremos cómo registrar las respuestas de flash de conos ratón utilizando un electrodo de succión.

Una sola célula grabaciones de succión de los conos del ratón

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Métodos para grabaciones de parche Capacidad de la pinza del cáliz

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Investigación

Biología

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

Las grabaciones de células enteras del cerebro del adulto de Drosophila

In this video, we demonstrate the procedure for isolating whole brains from adult Drosophila in preparation for recording from single neurons. We begin by ...

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Preparación de una sola célula suspensiones de bazo de ratón con el disociador gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

La preparación estandarizada de un solo suspensiones de células de tejido pulmonar de ratón con el disociador gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Perfiles de transcripción de los organismos unicelulares de los cardiomiocitos de ratón adulto

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Aislamiento de células endoteliales de la luz de arterias carótidas de ratón para experimentos multiómicos unicelulares

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Isolation of Nuclei from Flash-Frozen Liver Tissue for Single-Cell Multiomics

Aislamiento de núcleos de tejido hepático congelado rápidamente para multiómica unicelular

The liver is a complex and heterogenous tissue responsible for carrying out many critical physiological functions, such as the maintenance of energy ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Preparación de suspensión unicelular del intestino de tilapia del Nilo para secuenciación unicelular

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...