Name: single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors
Uploaded: 2010-01-05T20:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors at JoVE.com

Med stöd av Career Development Award från Forskning kring att förebygga blindhet, NIH bevilja EY 019.312, och fritt anslag från Forskning kring att förebygga blindhet och EY 02.687 (Ögonkliniken och Visual Sciences vid Washington University).

Göra elektroder <ol><li> Gör inspelningen elektroderna med en mikropipett avdragare och polera elektroderna med värme glödtråd i mikroskop. För musen kon encelliga sug inspelning är innerdiametern på elektroden tips om 6-7 ìm. </li><li> Förbered referens elektroder. Väg 1% agar i destillerat vatten. Smält agar lösningen i hett vattenbad. Fyll glaspipetter (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) med 1% agar med spruta. Stelna agarn vid rumstemperatur i 10 minuter. </li><li> Skär pipetterna i två halvor med en ...

<ol>
	<li>Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+fluctuations+in+membrane+current+of+single+toad+rod+outer+segments.">Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments.</a> Nature. 269, 78-80 (1977).</li><li>Nikonov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptors+of+Nrl+-/-+mice+coexpress+functional+S-+and+M-cone+opsins+having+distinct+inactivation+mechanisms.">Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms.</a> J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).</li><li>Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+features+of+the+S-+and+M-cone+photoreceptors+of+wild-type+mice+from+single-cell+recordings.">Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings.</a> J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).</li><li>Applebury, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+a+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27, 513-523 (2000).</li><li>Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+that+underlie+bleaching+and+background+adaptation.">Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation.</a> J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).</li><li>Calvert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototransduction+in+transgenic+mice+after+targeted+deletion+of+the+rod+transducin+alpha+-subunit.">Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).</li></ol>

Encelliga sug inspelning från ljusmätare celler utvecklades tre decennier sedan. Det ger oss möjlighet att spela in trans-membran aktuella förändringar framkallade av ljus utan att tränga igenom cellmembranet. På grund av hög cell-cell adhesion, är det svårt att isolera friska enda tappar och stavar från mus näthinnan som amfibie näthinnan och det är svårt att hitta individuella kottar på grund av den låga andelen (3%) och liten storlek. Den inre etapper-i (IS-in) inspelningsmetod övervinner detta prob...

single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors

Rod och kon fotoreceptorer i näthinnan är ansvariga för detektering av ljus. I mörker, cyklisk nukleotid-medierade (CNG) kanaler i det yttre segmentet är öppna och tillåter katjoner flöda stadigt inåt över membranet, depolariserande cellen. Ljusexponering utlöser stängningen av CNG-kanaler, kvarter för aktiv ning ström, och därmed resulterar i cell hyperpolarisering. Baserat på polaritet fotoreceptorer, var ett sug inspelning metod som utvecklats på 1970-talet att till skillnad från den klassiska patch-clamp teknik, kräver inte att tränga in i plasmamembranet<sup&gt; 1</sup&gt;. Rita den yttre segmentet in i en tättslutande glaspipett fylld med extracellulära lösning möjliggör inspelning på aktuella förändringar i enskilda celler på test-blixt exponering. Men denna väletablerade &quot;yttre etapper-i (OS-in)&quot; sug inspelning är inte lämplig för inspelningar mus kon, på grund av den låga andelen kottar i musen näthinnan (3%) och svårigheter att identifiera konen yttre segment. Nyligen var en inre etapper-i (IS-in) inspelning konfiguration utvecklats för att dra det inre segmentet / nukleära området kring fotoreceptor in i inspelningen pipetten<sup&gt; 2,3</sup&gt;. I denna video visar vi hur du spelar in från enskilda photoresponses musen konen med hjälp av encelliga sug elektrod.

Watch this Scientific Journal Video about Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors at JoVE.com

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Vi kommer att visa hur man kan spela flash svar från enstaka mus kottar med hjälp av en sug-elektrod.

Encelliga Sug Inspelningar från fotoreceptorer Mus Cone

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Metoder för Kapacitans Patch Clamp inspelningar från Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

Helcells Inspelningar från hjärnan hos vuxna Drosophila

In this video, we demonstrate the procedure for isolating whole brains from adult Drosophila in preparation for recording from single neurons. We begin by ...

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Beredning av encelliga Suspensioner från musmjälte med gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Standardiserade Beredning av encelliga Suspensioner från mus lungvävnad med gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generering av encelliga Suspensioner från mus nervvävnad

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Single Cell transkriptionell Profilering av Vuxen mus Cardiomyocytes

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Isolering av endotelceller från lumen i mushalspulsåder för encelliga multi-omics-experiment

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Isolation of Nuclei from Flash-Frozen Liver Tissue for Single-Cell Multiomics

Isolering av kärnor från flashfrusen levervävnad för encells multiomik

The liver is a complex and heterogenous tissue responsible for carrying out many critical physiological functions, such as the maintenance of energy ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Encellssuspensionspreparat från Nile Tilapia-tarmen för encellssekvensering

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...