Name: single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors
Uploaded: 2010-01-05T20:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors at JoVE.com

Körlük ve EY 02.687 (Washington Üniversitesi Göz Hastalıkları ve Görsel Bilimleri Bölümü) önleyin Araştırma Körlük, NIH hibe EY 019.312 ve sınırsız ödenekle Önlemek için Kariyer Geliştirme Ödülü Research tarafından desteklenir.

Elektrotlar yapma <ol><li> Mikropipet çektirmenin kullanarak kayıt elektrotları olun ve mikroskop altında ısıtma filament elektrotlar lehçe. Fare koni tek hücreli emme kayıt için, elektrot ucu iç çapı yaklaşık 6-7 mm. </li><li> Referans elektrot hazırlayın. Distile su içinde% 1 agar tartılır. Agar çözüm sıcak su banyosunda eritin. Şırınga kullanarak% 1 agar ile cam pipetler (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) doldurun. 10 dakika boyunca oda sıcaklığında agar katılaşmaya. </li><li> Pipetl...

<ol>
	<li>Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+fluctuations+in+membrane+current+of+single+toad+rod+outer+segments.">Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments.</a> Nature. 269, 78-80 (1977).</li><li>Nikonov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptors+of+Nrl+-/-+mice+coexpress+functional+S-+and+M-cone+opsins+having+distinct+inactivation+mechanisms.">Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms.</a> J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).</li><li>Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+features+of+the+S-+and+M-cone+photoreceptors+of+wild-type+mice+from+single-cell+recordings.">Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings.</a> J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).</li><li>Applebury, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+cone+photoreceptor:+a+single+cone+type+expresses+both+S+and+M+opsins+with+retinal+spatial+patterning.">The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning.</a> Neuron. 27, 513-523 (2000).</li><li>Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+that+underlie+bleaching+and+background+adaptation.">Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation.</a> J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).</li><li>Calvert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototransduction+in+transgenic+mice+after+targeted+deletion+of+the+rod+transducin+alpha+-subunit.">Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).</li></ol>

Fotoreseptör hücrelerinin Tek hücreli emme kayıt 3 yıl önce geliştirilmiştir. Bu hücre zarının delinmesi ışık stimülasyonu ile indüklenen trans-membran geçerli değişikliği kaydetmek için bize sağlar. Yüksek hücre-hücre adezyon Çünkü, amfibi retina gibi fare retinanın sağlıklı tek bir çubuk ve koni izole etmek zor ve düşük oranda (% 3) ve küçük boyutu nedeniyle bireysel konileri bulmak zordur. Iç kademeli (IS-in) kayıt yöntemi bir koni dahil olabilir, bunların arasında birkaç ...

single-cell suction recordings from mouse cone photoreceptors

Çubuk ve koni retinadaki fotoreseptör ışık algılama sorumludur. Karanlıkta, dış segmente siklik nükleotid kapılı (CNG) kanalları açıktır ve katyonların hücre depolarize zarından içeri doğru istikrarlı bir şekilde akmasına izin verin. Işığa maruz kalma CNG kanalları, bloklar içe katyon akım, ve böylece hücre hiperpolarizasyon sonuçları kapatılması tetikler. Fotoreseptörlerin polarite dayanarak, bir emme kayıt yöntemi klasik yama klemp tekniği aksine, plazma zarı delinmesi gerektirmez, 1970&#39;li yıllarda geliştirilen<sup&gt; 1</sup&gt;. Ekstrasellüler çözümü ile dolu sıkı oturan bir cam pipet içine dış segmente Çizim test flaş pozlama üzerine tek tek hücrelerin içinde güncel değişiklikler kayıt sağlar. Ancak, bu köklü &quot;dış segment (OS)&quot; emme kayıt fare retinanın koni düşük oranda (% 3) ve koni belirlenmesinde zorluklar nedeniyle, fare koni kayıtları için uygun değildir dış segmentleri. Son zamanlarda, bir iç-segment (IS) kayıt yapılandırma kayıt pipet içine iç segment / fotoreseptör nükleer bölge çizmek için geliştirilmiştir<sup&gt; 2,3</sup&gt;. Bu video, tek hücreli emme elektrot kullanarak bireysel fare koni photoresponses nasıl kayıt gösterecektir.

Watch this Scientific Journal Video about Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors at JoVE.com

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Biz bir emme elektrot kullanarak tek bir fare kozalakları flaş cevaplarını kaydetmek için nasıl gösterecektir.

Tek hücreli fare Koni fotoreseptörlerin Emiş Kayıtlar

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Kaliks Patch Kelepçe Kapasitans Kayıtlar Yöntemleri

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

Yetişkin Drosophila Beyin Tüm Hücre Kayıtlar

In this video, we demonstrate the procedure for isolating whole brains from adult Drosophila in preparation for recording from single neurons. We begin by ...

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Fare Dalak gentleMACS Dissociator Tek Hücreli Cezalar hazırlanması

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Standardize Hazırlık gentleMACS Dissociator kullanarak Fare Akciğer Doku Tek Hücre Cezalar

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Yetişkin Fare kardiyomiyositlerde Tek Hücre transkripsiyonel Profilleme

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Elde Edilen Fare Üretimi

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation of Endothelial Cells from the Lumen of Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Multi-Omics Experiments

Tek Hücreli Multi-Omik Deneyler için Fare Karotis Arterlerinin Lümeninden Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

Atherosclerosis is an inflammatory disease of the arterial regions exposed to disturbed blood flow (d-flow). D-flow regulates the expression of genes in ...

Isolation of Nuclei from Flash-Frozen Liver Tissue for Single-Cell Multiomics

Tek Hücreli Multiomikler için Flaş Dondurulmuş Karaciğer Dokusundan Çekirdeklerin İzolasyonu

The liver is a complex and heterogenous tissue responsible for carrying out many critical physiological functions, such as the maintenance of energy ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Tek Hücreli Dizileme için Nil Tilapia Bağırsağından Tek Hücreli Süspansiyon Hazırlığı

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...