Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

We zijn dankbaar dat S. Arber voor de mGFP muizen en aan leden van de Zervas lab, die kritisch te lezen de krant en op voorwaarde dat technische bijstand. A. Brown werd ondersteund door een Brain Science Kaplan Summer Graduate Research Award. E. Normand werd ondersteund door een Brain Science Program Graduate Research Award. Dit onderzoek werd ook gefinancierd door het opstarten van de middelen voor onderzoek (MZ).

Tamoxifen voorbereiding en mondelinge Gavage Procedure (E8.5) <ul><li> Bereid een 20 mg / ml stockoplossing van tamoxifen door het oplossen van tamoxifen in de voorverwarmde maïsolie. </li><li> Incubeer de oplossing bij 37 ° C gedurende 2 uur op een nutator en vortex met tussenpozen. </li><li> Bescherm de tamoxifen voorraad van licht, bewaren bij 4 ° C, en gebruik voor maximaal een maand. </li><li> Voor het lot in kaart brengen van experimenten, stelt een kweekkoppel dat bestaat uit een Zwitsers Webster vrouw (wild...

<ol>
	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

Het GIFM systeem dat we hebben laten zien kan worden gebruikt om een ​​breed scala van vragen in een verscheidenheid van cellulaire processen te beantwoorden. Kan bijvoorbeeld muizen ontwikkeld met verschillende Cre drivers worden gebruikt om een ​​celtype, weefsel of genetische afstamming van belang doel. Bovendien, omdat tamoxifen kan worden toegediend op elk gewenst embryonale of postnatale tijdstip, kan recombinatie worden gericht op alle relevante ontwikkelingsfase. De ruimtelijke en temporele controle van ...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

Fate kaarten worden gegenereerd door deze te markeren en het bijhouden van cellen in vivo te bepalen hoe voorouders bijdragen aan de specifieke structuren en celtypes in het ontwikkelen en volwassen weefsel. Een voorschot in dit concept is G enetic ik nducible F at M apping (GIFM), het koppelen van genexpressie, lot van de cel, en cel-gedrag in vivo, het lot kaarten gebaseerd op genetische afstamming te creëren. GIFM exploits X-Creer lijnen waarbij X een gen of een reeks van gen-regulatorische elementen die de ruimtelijke expressie van een aangepaste bacteriofaag eiwit, Cre-recombinase (Creer T) verleent. Creer T bevat een aangepaste e Strogen r eceptor ligand bindend domein dat Creer T maakt afgezonderd in het cytoplasma in de afwezigheid van het geneesmiddel tamoxifen. De binding van tamoxifen releases Creer T, die naar de kern en bemiddelt recombinatie tussen DNA-sequenties geflankeerd door loxP sites. In GIFM, recombinatie treedt meestal op tussen een loxP geflankeerd Stop cassette voorafgaand aan een reporter-gen, zoals GFP. Muizen zijn gefokt om ofwel een regio-of celtype-specifieke Creer en een voorwaardelijke verslaggever allel bevatten. Onbehandelde muizen hebben geen markering, omdat de Stop-cassette in de verslaggever voorkomt verdere transcriptie van het reportergen. Wij beheren tamoxifen door orale sondevoeding aan timed-drachtige vrouwtjes, die tijdelijke controle van Creer T release en de daarna translocatie naar de kern het verwijderen van de Stop cassette van de verslaggever biedt. Naar aanleiding van recombinatie, de verslaggever allel is constitutief en heritably uitgedrukt. Deze reeks van gebeurtenissen merken cellen zodanig dat hun genetische geschiedenis onuitwisbaar is vastgelegd. De gerecombineerde verslaggever dient dus als een high fidelity genetische afkomst tracer die, eenmaal op, is losgekoppeld van de genexpressie in eerste instantie gebruikt om Creer T rijden. Wij passen GIFM in de muis om een ​​normale ontwikkeling en vast te stellen de bijdrage van genetische lineages tot volwassen soorten cellen en weefsels te bestuderen. We gebruiken ook GIFM om cellen te volgen op de mutant genetische achtergronden om beter te begrijpen complexe fenotypen die opvallende kenmerken van de menselijke genetische aandoeningen na te bootsen. Deze video artikel leidt onderzoekers door middel van experimentele methoden om met succes toe te passen GIFM. Tonen we de methode met behulp van onze goed gekarakteriseerde Wnt1-Creer T; mGFP muizen door het toedienen van tamoxifen bij embryonale dag (E) 8.5 via orale sondevoeding, gevolgd door ontleding bij E12.5 en analyse door epifluorescentie stereomicroscopie. We hebben ook laten zien hoe het lot in kaart gebracht domeinen micro-ontleden voor explantatie voorbereiding of FACS-analyse en ontleden volwassen lot-mapped hersenen voor de ganse berg fluorescerende beeldvorming. Tezamen zijn deze procedures kunnen de onderzoekers de kritische vragen in de ontwikkelingsbiologie en ziekte-modellen adres.

Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetische Induceerbare Fate Mapping (GIFM) merken en tracks cellen met fijne ruimtelijke en temporele controle<em&gt; In vivo</em&gt; En belicht hoe de cellen van een specifieke genetische afstamming een bijdrage leveren aan het ontwikkelen en volwassen weefsels. Hier blijkt zijn de technieken die nodig zijn om het lot kaart E12.5 muis embryo&#39;s voor epifluorescerende en explantatie analyse.

Een praktische benadering van genetische Induceerbare Fate Mapping: een visuele gids voor Mark en Track Cellen In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Methode voor Cultuur van Early kippenembryo&#39;s ex vivo (Nieuwe Cultuur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Dubbele Hele Mount in situ hybridisatie van het vroege embryo&#39;s Chick

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

Een magnetisch Tether System om visuele en olfactorische Mediated Flight Control in Drosophila Onderzoek

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

Een omgekeerde genetische benadering van functionele redundantie Test tijdens de embryogenese

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Lot in kaart brengen van menselijke embryonale stamcellen door teratoom Formation

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Single Cell Fate Mapping in de zebravis

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomeer Explantaten om te testen voor mobiele Fate Commitment tijdens de embryonale ontwikkeling

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Een praktische gids voor Phylogenetics voor Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validatie van een muismodel voor LINC Complexen verstoren in een cel-specifieke manier

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

Genoombrede kartering van Drug-DNA interacties in cellen met kosmische (Crosslinking van kleine moleculen te isoleren chromatine)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...