Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
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Wir sind dankbar, S. Arber für die mGFP Mäusen und an die Mitglieder des Zervas Labor, die kritisch die Zeitung lesen und leistete technische Hilfe. A. Brown wurde von einem Brain Science Kaplan Sommer Graduate Research Award unterstützt. E. Normand wurde von einem Brain Science Program Graduate Research Award unterstützt. Diese Arbeit wurde auch von Startup-Forschungsmittel (MZ) finanziert.

Tamoxifen Vorbereitung und orale Gabe Procedure (E8.5) <ul><li> Bereiten Sie eine 20 mg / ml Stammlösung von Tamoxifen durch Auflösen von Tamoxifen in vorgewärmte Maisöl. </li><li> Inkubieren Sie die Lösung bei 37 ° C für 2 Stunden auf einem Kolbenpendel und Wirbel intermittierend. </li><li> Schützen Sie die Tamoxifen Lager vor Licht, Lagerung bei 4 ° C, und die Verwendung von bis zu 1 Monat. </li><li> Für das Schicksal Mapping-Experimente, stellen Sie eine Zucht Paar bestehend aus einem Swiss Webster weibli...

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	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

Die GIFM System, das wir haben gezeigt, kann ein breites Spektrum von Fragen in einer Vielzahl von zellulären Prozessen zu beantworten. Zum Beispiel können Mäuse mit unterschiedlichen Cre-Treiber entwickelt, verwendet werden, um jeden Zelltyp, Gewebe-oder genetische Linie des Interesses Ziel sein. Darüber hinaus, weil Tamoxifen jederzeit embryonalen oder postnatale Zeitpunkt verabreicht werden kann, kann Rekombination, alle relevanten Entwicklungsstadium ausgerichtet sein. Die räumliche und zeitliche Steuerung dies...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

Fate Karten sind durch Markierung und Verfolgung von Zellen in vivo zu bestimmen, wie Vorläuferzellen zu bestimmten Strukturen und Zelltypen in Entwicklungsländern beitragen und adulten Gewebe erzeugt. Ein Fortschritt in diesem Konzept ist G enetic ich nducible F aß M apping (GIFM), verbindet die Genexpression, Zell-Schicksal, und Zelle Verhaltensweisen in vivo, um das Schicksal Karten auf genetische Abstammung zu erstellen. GIFM nutzt X-créer Linien, in denen X ist ein Gen oder eine Gruppe von Gen-regulatorischen Elementen, die räumliche Ausdruck eines veränderten Bakteriophagenprotein, Cre-Rekombinase (Creer T) verleiht. Creer T enthält eine geänderte e strogen r eceptor Ligandenbindungsdomäne die Creer T macht sequestriert im Zytoplasma in Abwesenheit des Medikaments Tamoxifen. Die Bindung von Tamoxifen Releases Creer T, die in den Zellkern und vermittelt Rekombination zwischen DNA-Sequenzen von loxP-Stellen flankiert transloziert. In GIFM, Rekombination tritt typischerweise zwischen einem loxP flankiert Stop-Kassette vor einem Reportergen wie GFP. Mäuse gezüchtet werden, um entweder eine Region-oder Zelltyp-spezifische créer und eine bedingte Reporter Allel enthalten. Unbehandelte Mäuse müssen nicht markiert, da die Stop-Kassette in den Reporter verhindert die weitere Transkription des Reportergens. Wir verwalten Tamoxifen durch orale Gabe zu timed-trächtige Weibchen, die zeitliche Steuerung der Creer T Freisetzung und die anschließende Translokation in den Zellkern Entfernen der Stop-Kassette aus dem Reporter bietet. Nach Rekombination ist die Reporter-Allels konstitutiv und heritably ausgedrückt. Die Veranstaltungsreihe markiert Zellen, so dass ihre genetische Geschichte unauslöschlich wird aufgezeichnet. Die rekombiniert Reporter dient somit als High-Fidelity-genetische Abstammung Tracer, der, einmal auf, von der Gen-Expression zunächst zur Creer T-Laufwerk entkoppelt ist. Wir wenden GIFM in der Maus eine normale Entwicklung und ermitteln den Beitrag der genetischen Abstammungslinien zu erwachsenen Zelltypen und Geweben zu untersuchen. Wir verwenden auch GIFM auf Zellen mutierten genetischen Hintergründen folgen, um ein besseres Verständnis komplexer Phänotypen, die hervorstechenden Merkmale des menschlichen genetischen Erkrankungen imitieren. Dieses Video Artikel führt Forscher durch experimentelle Methoden erfolgreich anzuwenden GIFM. Wir demonstrieren die Methode mit unseren gut charakterisiert Wnt1-créer T; mGFP Mäusen durch die Gabe von Tamoxifen bei embryonalen Tag (E) 8,5 über orale Gabe von dissection bei E12.5 und Analyse von Epifluoreszenz Stereomikroskopie gefolgt. Wir zeigen auch, wie die Mikro-sezieren Schicksal abgebildet Domains für Explantation Vorbereitung oder FACS-Analyse und sezieren Erwachsenen Schicksal-mapped Gehirne für ganze Berg Fluoreszenz-Imaging. Gemeinsam ermöglichen diese Verfahren Forscher auf kritische Fragen in der Entwicklungsbiologie und Krankheitsmodelle Adresse.

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A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetische Inducible Fate Mapping (GIFM) markiert und verfolgt Zellen mit feinen räumlichen und zeitlichen Steuerung<em&gt; In vivo</em&gt; Und erläutert, wie sich Zellen aus einer bestimmten genetischen Linie auf die Entwicklung und adulten Geweben beitragen. Hier zeigten die Techniken erforderlich, um das Schicksal Karte E12.5 Mausembryonen für epifluoreszenten und Explantation Analyse.

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark und Track Cells In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Method for Culture of Early Hühnerembryonen ex vivo (New Culture)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Forschung

Biologie

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

A Magnetic Tether System zur visuellen und olfaktorischen Mediated Flight Control in Drosophila Untersuchen

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

Ein Reverse Genetic Ansatz zur funktionellen Redundanz während der Embryogenese-Test

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Fate Mapping von humanen embryonalen Stammzellen durch Teratom Formation

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Single Cell Fate Mapping im Zebrafisch

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomere Explantate für das Schicksal der Zelle Engagement während der embryonalen Entwicklung Testen

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

A Practical Guide to Phylogenetics für Nichtexperten

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validierung eines Maus-Modell zu LINC Komplexe Disrupt in einem zellspezifisch

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

Genomweite Kartierung der Drug-DNA-Wechselwirkungen in Zellen mit COSMIC (Vernetzung von kleinen Molekülen, um Chromatin isolieren)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...