Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

אנו מודים ס Arber עבור העכברים mGFP ולחברי במעבדה Zervas מי אנושות לקרוא את העיתון וסיפקה סיוע טכני. א &#39;בראון נתמכה על ידי המוח המדע פרס קפלן קיץ מחקר לתארים מתקדמים. א Normand נתמכה על ידי מדעי המוח פרס תוכנית מחקר לתואר שני. מחקר זה מומן גם על ידי קרנות מחקר הזנק (MZ).

טמוקסיפן הכנה נוהל Gavage שבעל פה (E8.5) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​פתרון המניות של טמוקסיפן ידי המסת טמוקסיפן בשמן תירס מחומם מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הפתרון על 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות nutator ו מערבולת לסירוגין. </l...

<ol>
	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

המערכת GIFM שאנחנו הוכיחו יכול לשמש כדי לענות על מגוון רחב של שאלות במגוון של תהליכים תאיים. למשל, בעכברים מהונדסים עם נהגים שונים Cre יכול לשמש מטרה לכל סוג תא, רקמה או שושלת היוחסין הגנטי של עניין. בנוסף, בגלל טמוקסיפן יכול להינתן בכל נקודת זמן עובריים או לאחר הלידה, רקו?...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

מפות הגורל נוצרות על ידי סימון ומעקב אחר תאים in vivo כדי לקבוע כיצד אבות לתרום מבנים ספציפיים סוגי תאים בפיתוח רקמות מבוגר. מראש המושג הזה הוא אני G enetic nducible F אכלו M apping (GIFM), המקשר ביטוי גנים, גורל התא, והתנהגויות תא in vivo, כדי ליצור מפות גורל מבוסס על השושלת הגנטית. GIFM מנצל X-קואל קווי כאשר X הוא גן או קבוצת גנים גורמים רגולטוריים אשר מקנה הביטוי המרחבי של חלבון bacteriophage שונה, Cre recombinase (קואל T). קואל T מכיל שונה דואר strogen r תחום eceptor ליגנד מחייב אשר הופך קואל T מוחרם בציטופלסמה בהיעדר התרופה טמוקסיפן. הכריכה של טמוקסיפן משחרר קואל T, אשר translocates לגרעין ו רקומבינציה מתווכת בין רצפי DNA מוקף אתרים loxP. ב GIFM, רקומבינציה מתרחשת בדרך כלל בין loxP מוקף הפסק הקלטת הקודמת גן הכתב כגון GFP. עכברים הם גידלו להכיל או אזור או סוג תא ספציפי קואל ו אלל כתב מותנה. עכברים שלא טופלו בחומר לא יהיה סימון כי קלטת עצור הכתב מונע שעתוק נוסף של הגן הכתב. אנו לנהל טמוקסיפן ידי gavage אוראלי מתוזמן נשים בהריון, אשר מספק שליטה הזמני של שחרור T קואל ו טרנסלוקציה לאחר גרעין הסרת קלטת עצור מן הכתב. בעקבות רקומבינציה, את האלל הוא כתב constitutively והביע heritably. זו סדרה של אירועים סימני תאים כאלה שההיסטוריה הגנטי שלהם נרשם בל יימחה. הכתב recombined ובכך משמש נותב איכות גבוהה שושלת גנטית, פעם אחת, הוא מנותקים ביטוי הגן השתמשו בתחילה לנהוג T קואל. אנו מיישמים GIFM בעכבר ללמוד התפתחות תקינה ועל תרומתו לבירור של שושלות גנטיות סוגי תאים ורקמות מבוגר. בנוסף, אנו משתמשים GIFM לעקוב תאים על רקע גנטי מוטציה כדי להבין טוב יותר פנוטיפים מורכבים המחקות המאפיינים הבולטים של הפרעות גנטיות האדם. מאמר זה וידאו מדריכים החוקרים באמצעות שיטות ניסיוניות בהצלחה להחיל GIFM. אנו מדגימים את השיטה באמצעות מאופיין היטב שלנו Wnt1-T קואל, עכברים mGFP ידי מתן טמוקסיפן ביום עובריים (E) 8.5 gavage דרך הפה ואחריו לנתיחה בבית E12.5 וניתוח על ידי stereomicroscopy epifluorescence. אנחנו גם מדגימים כיצד מיקרו לנתח תחומים גורל ממופה להכנת explant או ניתוח FACS ו לנתח מבוגר גורל ממופה מוחות עבור הדמיה הר שלם ניאון. ביחד, נהלים אלה לאפשר לחוקרים לענות על שאלות קריטיות בביולוגיה התפתחותית ומודלים המחלה.

Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

מיפוי גנטי הגורל ועין מתנהלת (GIFM) סימני עקבות תאים עם שליטה במרחב ובזמן קנס<em&gt; In vivo</em&gt; ו מבהיר כיצד תאים משושלת גנטית ספציפית לתרום בפיתוח רקמות בוגרות. הפגינו הנה טכניקות נדרש גורל המפה E12.5 עוברי עכבר לניתוח epifluorescent ו explant.

גישה מעשית מיפוי גנטי ועין מתנהלת הגורל: מדריך חזותי כדי מארק עקוב אחר תאים In vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

שיטת לתרבות מוקדם של עוברים צ&#39;יק לשעבר vivo (תרבות חדש)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

הר שלם כפול באתרו הכלאה של עוברים צ&#39;יק מוקדם

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

מערכת מגנטית לקשור לחקור חזותית חוש הריח בקרת טיסה מתווך תסיסנית

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

גישה גנטית הפוך כדי בדיקת יתירות פונקציונלית במהלך embryogenesis

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

הגורל מיפוי בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי גיבוש תפלצת

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

תא בודד הגורל מיפוי של דג הזברה

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Explants Blastomere לבדיקת מחויבות גורל תא במהלך התפתחות עוברית

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

מדריך מעשי לphylogenetics לNonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

אימות של מודל עכבר לשבש מכלולי LINC באופן ספציפי בתא

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

מיפוי הגנום של תרופות-DNA בתאי אינטראקציות עם COSMIC (Crosslinking של מולקולות קטנות לבודד הכרומטין)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...