Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
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우리는 mGFP 마우스에 대한 S. 아버하고 비판적으로 신문을 읽고 기술 지원을 제공하는 Zervas 연구실의 구성원에 감사하고 있습니다. A. 브라운은 뇌 과학 카플란 여름 대학원 연구 상을 지원했다. E. 노르망는 뇌 과학 프로그램 대학원 연구 상을 지원했다. 이 연구는 또한 시동 연구 자금 (MZ)에 의해 재정 지원되었다.

Tamoxifen의 준비 및 구내 Gavage 절차 (E8.5) <ul><li> 사전 예열 옥수수 기름에 tamoxifen을 해소하여 tamoxifen의 20 MG / ML 재고 솔루션을 준비합니다. </li><li> 37 솔루션을 품어 ° C nutator과 간헐적으로 소용돌이로 2 시간. </li><li> 4 광 저장 ° C에서 tamoxifen 주식을 보호하고, 1 개월 최대 사용합니다. </li><li> 그리고 유전자 특정 크리어 T의 allele과 기자 allele 모두를 나르는 남자, 운명 매핑 실험 들?...

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	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

우리가 보여준 그 GIFM 시스템은 셀룰러 프로세스의 다양한 질문에 다양한 답변을하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 서로 다른 Cre 호텔 드라이버 엔지니어링 생쥐는 모든 세포 유형, 조직 또는 관심있는 유전자 혈통을 대상으로 사용할 수 있습니다. tamoxifen 어떤 배아 또는 출생 후의 시점에 시행 될 수 있기 때문에 또한, 재조합은 어떤 관련이 발달 단계에 타겟팅할 수 있습니다. 이 시스템의 ...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

운명의지도 progenitors가 개발 및 성인 조직에서 특정 구조 및 세포 유형에 기여하는 방법을 결정하는 생체내의 세포를 표시 및 추적에 의해 생성됩니다. 이런 개념에서 사전에 내가 유전자 혈통에 따라 운명이지도를 만드는, F는 유전자 발현, 세포의 운명, 그리고 생체내 세포의 동작을 연결, M apping (GIFM)를 먹은 nducible G enetic입니다. GIFM 이용 X - 크리어 라인 여기서 X는 수정된 박테리오 파지 단백질, Cre 호텔 recombinase (크리어 T)의 공간적 표현을 수여 유전자 규제 요소 유전자 또는 집합입니다. 크리어 T는 크리어 T를 렌더링으로 수정된 전자 strogen R eceptor의 리간드 바인딩 도메인을 포함하고 약물 tamoxifen의 부재에있는 세포질에서 분리된. loxP 사이트 둘러싸인 DNA 시퀀스 사이의 핵 및 mediates의 재조합에 translocates tamoxifen 출시 크리어 T의 결합. loxP 그런 GFP로 기자의 유전자를 앞에 카세트를 중지 어귀 사이 GIFM에서 재조합 일반적으로 발생합니다. 마우스는 어느 지역 또는 셀 타입 특정 크리어 및 조건부 기자 allele을 포함, 훈련하고 있습니다. 기자의 중지 카세트의 리포터 유전자의 추가 전송을 방지하기 때문에 치료 생쥐가 표시가 없습니다. 우리는 크리어 T 릴리스와 기자의 중지 카세트를 제거 핵에 후속 translocation의 시간적 제어를 제공 초과 - 임신 여성에 경구 gavage으로 tamoxifen을 관리할 수 있습니다. 재조합 다음, 기자의 allele은 constitutively하고 heritably 표시됩니다. 사건의이 시리즈는 자신의 유전자의 역사가 기록됩니다 indelibly 그러한 세포를 표시합니다. recombined 기자는 따라서, 한번에, 처음 크리어의 T를 운전하는 데 사용되는 유전자 발현의 uncoupled는 높은 충실도 유전자 혈통의 추적 역할을합니다. 우리는 성인 세포 유형과 조직에 유전 lineages의 정상적인 발전과 확인할 기여를 공부하기 위해 마우스 GIFM를 적용합니다. 우리는 또한 더 나은 인간의 유전 질환의 돌출 기능을 모방 복잡한 phenotypes을 이해하는 돌연변이 유전자 배경에 세포를 따라 GIFM 사용합니다. 실험 방법을 통해이 동영상이 문서에서는 가이드 연구자를 성공적으로 GIFM을 적용합니다. 우리는 잘 특징 Wnt1 - 크리어 T를 사용하는 방법을 보여줍니다; E12.5에서 절개 및 epifluorescence stereomicroscopy에 의해 분석하여 다음 구두 gavage 통해 배아 일 (E) 8.5에서 tamoxifen을 투여하여 mGFP 마우스. 우리는 또한 explant 준비 또는 외과 분석을위한 운명 매핑된 도메인을 마이크로 해부하다 및 전체 마운트 형광 이미징을위한 성인 운명 매핑 두뇌를 해부하다하는 방법을 보여줍니다. 총체적으로,이 절차는 연구자가 발달 생물학과 질병 모델에서 중요한 질문을 해결하실 수 있습니다.

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A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

유전자 Inducible의 운명 매핑 (GIFM) 마크와 훌륭한 공간과 시간적 제어 트랙 세포<em&gt; 생체내에</em&gt; 그리고 특정 유전 혈통의 세포가 개발하고 성인 조직에 기여하는 방법을 elucidates. epifluorescent 및 explant 분석을위한 운명지도 E12.5 마우스 배아에 필요한 기술은 여기에 보여주었다.

유전자 Inducible의 운명 매핑에 대한 실용적인 접근법 : 셀을 선택하고 추적하는 비주얼 가이드 VIVO에서</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

연구

생물학

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

조기 칙 태아의 현장 하이브리드화에서 더블 전체 산

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

Drosophila에서 Visual과 강한 중재 플라이트 컨트롤을 맡은 이후로 자기 테더 시스템

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

Embryogenesis 동안 중복 기능을 테스트하기 위해 역방향 유전자 접근

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Zebrafish의 단세포 운명 매핑

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomere Explants는 배아 개발하는 동안 세포 운명의 헌신에 대해 테스트 할

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

비전문가를위한 계통 발생에 대한 실용 가이드

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

마우스 모델의 유효성 검사는 세포 고유의 방식으로 LINC 단지를 방해

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

COSMIC와 세포의 약물-DNA 상호 작용의 게놈 넓은 매핑 (작은 분자의 가교는 염색질을 분리)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...