Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
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Somos gratos a S. Arber para os ratos mGFP e aos membros do laboratório que Zervas criticamente ler o jornal e prestou assistência técnica. A. Brown foi apoiado por uma Kaplan Ciência Prêmio Cérebro Verão de Pesquisa de Pós-Graduação. E. Normand foi apoiado por uma Ciência Prêmio Programa de Pós-Graduação Brain Research. Esta pesquisa também foi financiada por fundos de pesquisa de inicialização (MZ).

Tamoxifeno Preparação e Procedimento Gavage Oral (E8.5) <ul><li> Prepare uma solução estoque 20 mg / ml de tamoxifeno dissolvendo tamoxifeno na pré-aquecido o óleo de milho. </li><li> Incubar a solução a 37 ° C por 2 horas em um vortex nutator e de forma intermitente. </li><li> Proteger o estoque da loja tamoxifeno luz, a 4 ° C, e usar por até um mês. </li><li> Para experimentos de mapeamento destino, estabelecer um par de reprodução que consiste em um Webster suíço feminino (tipo selvagem; comprado de...

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	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

O sistema GIFM que temos demonstrado pode ser usado para responder a uma ampla gama de questões em uma variedade de processos celulares. Por exemplo, ratos geneticamente modificados com drivers diferentes Cre pode ser usado para atingir qualquer tipo de célula, tecido ou linhagem genética de interesse. Além disso, como o tamoxifeno pode ser administrado em nenhum momento embrionário ou pós-natal, a recombinação pode ser direcionada para qualquer fase de desenvolvimento relevantes. O controle espacial e temporal ...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

Mapas destino são gerados por marcação e rastreamento de células in vivo para determinar como progenitores contribuir para estruturas específicas e tipos de células no desenvolvimento e tecidos adultos. Um avanço neste conceito é G enetic eu nducible F comeu Mapear (GIFM), ligando a expressão do gene, o destino de células, e os comportamentos de células in vivo, para criar mapas de destino com base na linhagem genética. GIFM exploits X-creer linhas onde X é um gene ou conjunto de elementos reguladores de genes que conferem expressão espacial de uma proteína bacteriófago modificados, Cre recombinase (creer T). Creer T contém uma versão modificada e estrogênio r domínio ligante eceptor ligação que torna creer T seqüestrado no citoplasma na ausência da droga tamoxifen. A ligação do tamoxifeno releases creer T, que transloca para o núcleo e recombinação faz a mediação entre seqüências de DNA flanqueado por sites loxP. Em GIFM, a recombinação ocorre normalmente entre um loxP ladeado Parar cassete precedentes um gene repórter, como GFP. Camundongos são criados para conter uma região ou célula creer tipo específico e um alelo repórter condicional. Ratos não tratados não terá marcação porque a cassete Parar na transcrição impede repórter adicional do gene repórter. Nós administrar tamoxifeno por sonda oral para grávidas timed-fêmeas, que oferece um controle temporal da liberação creer T e translocação subseqüente ao núcleo remover a cassete Parar a partir do repórter. Após a recombinação, o alelo repórter é constitutivamente expressa e hereditariamente. Esta série de eventos marca as células de tal forma que sua história genética está indelevelmente gravada. O repórter recombinados, portanto, serve como um marcador de alta linhagem genética que a fidelidade, uma vez, é desacoplado da expressão do gene inicialmente usado para acionar T creer. Nós aplicamos GIFM em rato para estudar o desenvolvimento normal e contribuição de tomar conhecimento das linhagens genéticas de tipos de células adultas e tecidos. Nós também usamos GIFM para seguir em células mutantes origens genéticas para compreender melhor fenótipos complexos que imitam características mais salientes das doenças genéticas humanas. Este artigo vídeo guias pesquisadores através de métodos experimentais para aplicar com êxito GIFM. Nós demonstramos o método usando o nosso bem caracterizada Wnt1-creer T; ratos mGFP pela administração do tamoxifeno no dia embrionário (E) 8.5 via gavagem oral, seguida de dissecção no E12.5 e análise por estereomicroscopia epifluorescência. Também demonstramos como micro-destino dissecar domínios mapeados para a preparação do explante ou análise FACS e dissecar adultos destino cérebros mapeados para a imagem latente montar toda fluorescente. Coletivamente, esses procedimentos permitem aos pesquisadores para debater questões críticas em biologia do desenvolvimento e modelos de doença.

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A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genética induzível Destino Mapping (GIFM) marcas e faixas de células com o controle espacial e temporal bem<em&gt; In vivo</em&gt; E elucida como as células de uma linhagem genética específica contribuir para o desenvolvimento e tecidos adultos. Demonstrado aqui são as técnicas necessárias para o destino mapa E12.5 embriões de camundongos para a análise de epifluorescência e explante.

Uma Abordagem Prática para mapeamento genético induzível Fate: Um Guia Visual para Mark e Track Células In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Método para a Cultura de Embriões início pintainho ex vivo (Nova Cultura)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Biologia

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Monte Whole dupla hibridização in situ de embriões de galinha precoce

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

Um sistema de acoplamento magnético para Investigar controle de vôo visual e olfativo Mediated em Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

A abordagem inversa Genética para Teste de Redundância funcional durante a embriogênese

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Mapeamento de destino de células estaminais embrionárias humanas por formação de teratomas

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Mapeamento Destino única célula em Zebrafish

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Explantes blastômero para testar Compromisso destino celular durante o desenvolvimento embrionário

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Um Guia Prático para Phylogenetics para não especialistas

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

A validação de um modelo de camundongo para Disrupt Complexos LINC de um modo específico de célula

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

Mapeamento de todo o genoma de DNA Interações medicamentosas-em células com COSMIC (reticulação de moléculas pequenas para isolar Chromatin)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...