Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
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Damos las gracias a S. Arber para los ratones mGFP ya los miembros del laboratorio de Zervas que leer críticamente el papel y brindó asistencia técnica. A. Brown fue apoyado por una concesión de Ciencias del Cerebro de Verano de Investigación de Posgrado Kaplan. E. Normand fue apoyada por una ciencia del cerebro Premio de Investigación del Programa Graduado. Esta investigación también fue financiada por los fondos de investigación de inicio (MZ).

El tamoxifeno Preparación y Procedimiento sonda nasogástrica (E8.5) <ul><li> Preparar a 20 mg / ml de solución stock de tamoxifeno por disolución de tamoxifeno en el aceite de maíz pre-calentado. </li><li> Incubar la solución a 37 ° C durante 2 horas en un nutator y agitar de forma intermitente. </li><li> Proteger a la población de la luz con tamoxifeno, se almacenan a 4 ° C, y el uso de hasta un mes. </li><li> Para los experimentos de mapeo de destino, establecer un par de crianza que consiste en una hembra ...

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	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

El sistema GIFM que hemos demostrado se puede utilizar para responder a una amplia gama de preguntas en una variedad de procesos celulares. Por ejemplo, los ratones diseñados con diferentes conductores de Cre puede ser utilizada para combatir cualquier tipo de célula, tejido o linaje genético de interés. Además, dado que el tamoxifeno puede ser administrada en cualquier punto del tiempo embrionario y postnatal, la recombinación puede dirigirse a cualquiera de las fases de desarrollo correspondientes. El control es...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

Los mapas son generados por el destino marcado y seguimiento de las células in vivo para determinar cómo los progenitores contribuyen a estructuras específicas y los tipos de células en el desarrollo y los tejidos adultos. Un avance en este concepto es que G enetic nducible F comió M apping (GIFM), que une la expresión génica, el destino celular, y el comportamiento de células in vivo, para crear mapas de destino basada en el linaje genético. GIFM explota X-Creer líneas donde X es un gen o un conjunto de elementos reguladores de genes que confieren expresión espacial de una proteína bacteriófagos modificados, la recombinasa Cre (Creer T). Creer T contiene una modificación e estrogénico r dominio ligando eceptor vinculante que hace Creer T secuestrado en el citoplasma en ausencia de la droga tamoxifeno. La unión de tamoxifeno versiones Creer T, que se transloca al núcleo y la recombinación media entre las secuencias de ADN flanqueado por sitios loxP. En GIFM, la recombinación se produce normalmente entre un casete loxP flanqueado parada antes de un gen reportero, como las buenas prácticas agrarias. Los ratones son criados para contener una región o tipo de células específicas Creer y un alelo reportero condicional. Los ratones no tratados no se han marcado por la cinta parada en el Boletín previene la transcripción más del gen reportero. Nosotros administramos el tamoxifeno por sonda oral a tiempo, las mujeres embarazadas, que proporciona un control temporal de la liberación Creer T y posterior translocación al núcleo de quitar el cassette parada de la periodista. Después de la recombinación, el alelo periodista es constitutivamente y expresó heritably. Esta serie de eventos marca las células de tal manera que su historia genética está indeleblemente grabada. El periodista recombinados por lo tanto sirve como un marcador de linaje genético de alta fidelidad que, una vez encendido, es desacoplada de la expresión de los genes utilizados inicialmente para conducir T CREER. Aplicamos GIFM en ratón para estudiar el desarrollo normal y la contribución de determinar el linaje genético de los tipos de células y tejidos adultos. También utilizamos GIFM para seguir las células mutantes en las bases genéticas para comprender mejor los fenotipos complejos que imitan características principales de trastornos genéticos humanos. En este artículo de vídeo guías investigadores a través de métodos experimentales para aplicar con éxito GIFM. Demostramos el método que utiliza nuestro bien caracterizados Wnt1-Creer T, los ratones mediante la administración de tamoxifeno mGFP en el día embrionario (E) 8.5 a través de una sonda nasogástrica seguida de disección en E12.5 y análisis por microscopía estereoscópica epifluorescencia. También se muestra cómo micro-disección de dominios destino asignado para la preparación del explante o análisis FACS y diseccionar adultos mapeado destino, los cerebros de toda imagen de montaje fluorescente. En conjunto, estos procedimientos permiten a los investigadores a abordar las cuestiones críticas en la biología del desarrollo y modelos de enfermedades.

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A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genéticos inducible destino de asignación (GIFM) las marcas y las células de las pistas con un control preciso espacial y temporal<em&gt; In vivo</em&gt; Y define la forma en las células de un linaje genético específico contribuir al desarrollo y los tejidos adultos. Demostrado aquí son las técnicas necesarias para el destino de embriones de ratón E12.5 mapa para el análisis de epifluorescencia y explante.

Un enfoque práctico de elaboración de mapas genéticos inducible destino: una guía visual para marcar y rastrear las células En Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Método para la Cultura de primeros embriones del polluelo ex vivo (Nueva Cultura)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Investigación

Biología

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Monte doble entero hibridación in situ de embriones de pollo temprano

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

Un Sistema de Anclaje magnética para investigar control mediado de vuelo visual y olfativa en Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

Un enfoque de genética inversa para probar la redundancia funcional durante la embriogénesis

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

El destino de la asignación de células estaminales embrionarias humanas mediante la formación de teratoma

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Sola célula de mapeado de destino en el pez cebra

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Los explantes blastómeras para la Prueba de Compromiso destino celular durante el desarrollo embrionario

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Una guía práctica para Phylogenetics para no expertos

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validación de un modelo de ratón para interrumpir LINC Complejos en una celda de manera específica

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

Mapeo de todo el genoma de la droga-ADN interacciones en células con COSMIC (reticulación de pequeñas moléculas para aislar la cromatina)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...