Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

Vi är tacksamma för S. Arber för mGFP möss och till medlemmar i Zervas labb som kritiskt läsa tidningen och gav tekniskt bistånd. A. Brown fick stöd av en Brain Science Kaplan Sommar Graduate Research Award. E. Normand stöddes av en Brain Science Program Graduate Research Award. Denna forskning har också finansierats av start forskningsmedel (MZ).

Tamoxifen Beredning och oral sondmatning Procedure (E8.5) <ul><li> Förbered en 20 mg / ml stamlösning av tamoxifen genom att lösa tamoxifen i förvärmda majsolja. </li><li> Inkubera vid 37 ° C under 2 timmar på en nutator och vortexa intermittent. </li><li> Skydda tamoxifen lager från ljus, förvara vid 4 ° C och i upp till en månad. </li><li> För experiment öde kartläggning, upprätta ett avelspar som består av en schweizisk Webster hona (wildtype, köpt från Taconic) och en manlig bär både en gen spe...

<ol>
	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

Det GIFM system som vi har visat kan användas för att besvara en rad frågor i olika cellulära processer. Till exempel kan möss konstruerad med olika Cre förare kan användas för att rikta alla celltyper, vävnader eller genetisk härstamning av intresse. Dessutom, eftersom tamoxifen kan administreras när som embryonala eller postnatal tidpunkt kan rekombination riktas till alla relevanta utvecklingsstadiet. Den rumsliga och tidsmässiga kontrollen av detta system är idealiska för att undersöka hur celler som ...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

Ödet kartor genereras av märkning och spårning av celler in vivo för att avgöra hur stamceller bidrar till specifika strukturer och celltyper i att utveckla och vuxen vävnad. Ett förskott i detta begrepp är G enetic jag nducible F åt M apping (GIFM) som förbinder genuttryck, cell öde och beteenden cell in vivo, för att skapa öde kartor som bygger på genetisk härstamning. GIFM utnyttjar X-CreER linjer där X är en gen eller en uppsättning gener reglerande element som ger rumsliga uttryck för en modifierad bakteriofag protein, Cre recombinase (CreER T). CreER T innehåller en modifierad e strogen r eceptor ligandbindande domänen som gör CreER T bundet i cytoplasman i avsaknad av läkemedlet tamoxifen. Bindningen av tamoxifen releaser CreER T, som translocates till kärnan och förmedlar rekombination mellan DNA-sekvenser flankeras av loxP webbplatser. I GIFM sker rekombination vanligtvis mellan en loxP flankeras Stoppa kassetten innan en reporter gen som GFP. Möss är avlade för att innehålla antingen en region-eller cell typspecifika CreER och en villkorlig reporter allel. Obehandlad möss kommer inte att ha märkning eftersom Stoppa kassetten i reportern förhindrar ytterligare utskrift av reporter genen. Vi administrerar tamoxifen via oral sondmatning till tidsinställd-dräktiga honor, vilket ger temporal kontroll över CreER T utsläpp och efterföljande translokation till kärnan bort Stoppa kassetten från reportern. Efter rekombination är reporter allelen konstitutivt och heritably uttryckt. Denna serie av händelser markerar celler så att deras genetiska historia outplånlig spelas in. Den rekombinerat reporter fungerar alltså som en high fidelity genetisk härstamning spårämne som, när den är frikopplas från genuttryck användes ursprungligen för att driva CreER T. Vi tillämpar GIFM i mus för att studera normal utveckling och fastställa bidrag genetiska linjerna till vuxen celltyper och vävnader. Vi använder också GIFM följa celler på mutant genetisk bakgrund för att bättre förstå komplexa fenotyper som efterliknar framträdande dragen i människans genetiska sjukdomar. Denna video artikeln vägleder forskare genom experimentella metoder att framgångsrikt ansöka GIFM. Vi visar metoden att använda vår välkarakteriserade Wnt1-CreER T; mGFP möss genom att administrera tamoxifen på embryonala dag (E) 8,5 via oral sondmatning följt av dissektion vid E12.5 och analys med epifluorescence stereomikroskopi. Vi visar också hur mikro-dissekera öde kartlagda områden för Explantation förberedelser eller FACS analys och dissekera vuxna öde-mappade hjärnor för hela montera lysrör avbildning. Tillsammans står dessa förfaranden låta forskare att hantera kritiska frågor i utvecklingsbiologi och modeller sjukdom.

Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetiska inducerbara Fate Mapping (GIFM) märken och spår celler med fina tid och kontroll<em&gt; In vivo</em&gt; Och belyser hur celler från en viss genetisk härstamning bidra till att utveckla och vävnader vuxen. Visade här är de tekniker som krävs för att ödet kartan E12.5 musembryon för epifluorescent och Explantation analys.

En praktisk inställning till genetiska inducerbara Fate Mapping: En visuell guide till Mark och spår celler In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Dubbel Hela Montera in situ hybridisering för tidig kycklingembryon

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

En magnetisk Tether System för att undersöka Visuell och olfaktorisk Medierad Flight Control i Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

En omvänd Genetisk strategi till Test Funktionell Redundans under fosterutvecklingen

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Ödet Kartläggning av mänskliga embryonala stamcellslinjer som Teratom Bildning

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Encelliga Fate Kartläggning i zebrafisk

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomer Explantat att testa Cell Fate engagemang under embryonal utveckling

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

En praktisk guide till Phylogenetics för Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validering av en musmodell för att Disrupt LINC Anläggningar i en cell-specifik Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

Genomvid Kartläggning av narkotika DNA interaktioner i celler med COSMIC (Tvärbindning av små molekyler att isolera Chromatin)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...