Name: a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo
Uploaded: 2009-12-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

Biz mGFP fareler için S. Arber ve kağıt eleştirel okuma ve teknik yardım sağladı Zervas laboratuar üyelerine teşekkür ediyoruz. A. Brown Beyin Bilim Kaplan Yaz Lisansüstü Araştırma Ödülü ile desteklenmiştir. E. Normand Beyin Lisans Programı Lisansüstü Araştırma Ödülü ile desteklenmiştir. Bu araştırma aynı zamanda başlangıç ​​araştırma fonları (MZ) tarafından finanse edildi.

Tamoksifen hazırlanması ve ağızdan sonda Prosedürü (E8.5) <ul><li> Önceden ısıtılmış mısır yağı tamoksifen eriterek tamoksifen bir 20 mg / ml stok solüsyonu hazırlayın. </li><li> 37 ° çözüm inkübe ° C nutator ve aralıklı olarak vorteks üzerinde 2 saat. </li><li> 4 ışık, mağaza ° C tamoksifen stok koruyun ve bir aya kadar kullanabilirsiniz. </li><li> Bir genin özel CreER T alleli ve bir muhabir aleli taşıyan bir erkek; kaderi haritalama deneyler için, Swiss Webst...

<ol>
	<li>Ellisor, D., Koveal, D., Hagan, N., Brown, A., Zervas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+conditional+reporter+alleles+in+the+developing+embryo+and+embryonic+nervous+system.">Comparative analysis of conditional reporter alleles in the developing embryo and embryonic nervous system.</a> Gene Expr Patterns. 9, 475-489 (2009).</li><li>Zervas, M., Millet, S., Ahn, S., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+behaviors+and+genetic+lineages+of+the+mesencephalon+and+rhombomere+1.">Cell behaviors and genetic lineages of the mesencephalon and rhombomere 1.</a> Neuron. 43, 345-357 (2004).</li></ol>

Olduklarını ortaya koyduk GIFM sistemi geniş bir yelpazede hücresel süreçlerin çeşitli soruları cevaplamak için kullanılacak. Örneğin, farklı Cre sürücüleri ile mühendislik fareler, herhangi bir hücre tipi, doku veya ilgi genetik soy hedef kullanılabilir. Buna ek olarak, tamoksifen embriyonik ya da doğum sonrası herhangi bir zaman noktasında idare olabilir, çünkü, rekombinasyon, ilgili herhangi bir gelişme aşamasına hedef olabilir. Bu sistemin mekansal ve zamansal kontrol belirli genleri ifa...

a practical approach to genetic inducible fate mapping: a visual guide to mark and track cells in vivo

Kader haritalar atalarıdır, gelişmekte olan ve yetişkin doku özel yapılar ve hücre tiplerinin nasıl katkıda belirlemek için, in vivo hücre işaretleme ve izleme tarafından üretilir. Bu kavramı bir ilerleme genetik soy dayalı kaderi haritaları oluşturmak için, F, M aritalandırma (GIFM) gen ekspresyonu, hücre kaderi, ve in vivo hücre davranışları birbirine bağlayan yedik nducible, G enetic. GIFM patlatır X-CreER hatları burada X, değiştirilmiş bir bakteriyofaj protein, Cre recombinase (CreER T) mekansal ifade bahşeder gen ya da gen düzenleyici elemanlar bir set. CreER T, T CreER kılan bir değiştirilmiş bir e strogen r eceptor ligand bağlayıcı etki alanı içeren ilaç tamoksifen yokluğunda sitoplazma saklamış. LoxP siteleri tarafından çevrili DNA dizilimleri arasındaki çekirdek ve aracılık rekombinasyon translocates tamoksifen bültenleri CreER T, bağlayıcı değildir. LoxP bir muhabir gibi GFP geninin önceki kaset Dur çevrili arasında GIFM, rekombinasyon genellikle oluşur. Fare, bir bölge veya hücre tipine özgü CreER ve koşullu bir muhabir aleli içeren cins vardır . Muhabir Durdur kaset muhabir gen transkripsiyonu önler, çünkü tedavi görmeyen farelere işaretleme olmayacaktır. CreER T serbest bırakılması ve muhabir Durdur kaset çıkarmadan çekirdeğine sonraki translokasyon zamansal kontrolü sağlar zamanlı hamile kadın, ağızdan sonda ile tamoksifen yönetmek. Rekombinasyon sonra, muhabir allel yapısal ve heritably ifade. Bu olaylar dizisi, bu tür hücrelerin genetik geçmişi silinmez kayıtlı olduğunu işaret ediyor. Recombined muhabiri, böylece, bir kez, başlangıçta CreER T sürmek için kullanılan gen ekspresyonu çözüldükten bir yüksek sadakat genetik soy tracer olarak hizmet vermektedir. Biz genetik soy, yetişkin hücre tipleri ve dokuların normal gelişimini ve katkısını tespit çalışma fare GIFM geçerlidir. Ayrıca hücreleri mutant genetik kökenden insan genetik bozukluklar göze çarpan özellikleri taklit karmaşık fenotipleri daha iyi anlamak için takip etmek GIFM kullanabilirsiniz. Deneysel yöntemlerle kılavuzları Bu video makalede araştırmacılar başarıyla GIFM uygulamak için. Biz iyi karakterize Wnt1-CreER T yöntemi kullanarak göstermek; E12.5 diseksiyon ve Epifloresans stereomicroscopy analiz ağızdan sonda ile embriyonik gün (E) 8.5 tamoksifen idare tarafından mGFP fareler. Ayrıca eksplant hazırlama veya FACS analiz kaderi eşlenen etki alanı mikro-incelemek ve tüm montaj floresan görüntüleme için yetişkin kader eşlenen beyinleri teşrih nasıl göstermektedir. Toplu olarak, bu işlemler, araştırmacılar, gelişim biyolojisi ve hastalık modelleri kritik soruları yanıtlamak için izin verir.

Watch this Scientific Journal Video about A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo at JoVE.com

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetik Đndüklenebilir Kader Haritalama (GIFM) işaretleri ve ince, mekansal ve zamansal kontrolü ile parça hücreleri<em&gt; In vivo</em&gt; Ve belirli bir genetik soy hücreleri, gelişmekte olan ve yetişkin dokularda katkıda bulunmak nasıl izah etmektedir. Epifluorescent ve eksplant analizi için kader haritası E12.5 fare embriyoları için gerekli teknikleri burada gösterdi.

Genetik Đndüklenebilir Kader Haritalama Pratik Bir Yaklaşım: Hücreler Mark ve Track Görsel Bir Rehberi In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Erken Civciv Embriyolar in situ Hibridizasyon Çift Tüm Dağı

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

Drosophila Görsel ve Koku aracılığı ile Uçuş Kontrol Araştırma Manyetik Tether Sistemi

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

Embriyo sırasında Fonksiyonel Artıklık Test Ters Genetik Yaklaşım

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Zebra balığı Tek Hücre Kader Haritalama

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomer Eksplantlarından Embriyonik gelişim sırasında Hücre Kader Taahhüt Test Etmek için

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Nonexperts için Phylogenetics İçin Pratik Kılavuz

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Fare Modeli Doğrulanması Hücre-spesifik şekilde LINC kompleksler bozacak

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC (Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin)

Genome-wide Mapping of Drug-DNA Interactions in Cells with COSMIC Crosslinking of Small Molecules to Isolate Chromatin

COSMIC ile Hücrelerde İlaç-DNA Etkileşimlerinin genom Haritalama (Küçük moleküllerinin çapraz bağlanmasını Kromatin yalıtmak için)

The genome is the target of some of the most effective chemotherapeutics, but most of these drugs lack DNA sequence specificity, which leads to ...