Name: puramatrix encapsulation of cancer cells
Uploaded: 2009-12-17T17:00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells at JoVE.com

ملاحظات فنية : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يبدأ تهليم من خلال إضافة الأملاح. لذا ، فمن الأهمية بمكان أن لا أملاح تأتي في اتصال مع PuraMatrix هو المطلوب حتى تهليم ؛ التعرض للأملاح أيونية قوة منخفضة جدا (على سبيل المثال ، &lt;0.05 م) سوف يتسبب تهليم لا رجعة فيه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن استخدام الحلول الأسهم المتبقية التي يتم إعدادها في وقت لاحق شريطة ألا يكونوا قد تأتي في اتصال مع الأملاح. كنت لا داعي للقلق بشأن صوتنة تكرار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن إزالة فقاعات الهواء aliquoting PuraMatrix في أنابيب معقمة تليها الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نكون حذرين للغاية خلال التغييرات وسائل الاعلام كما يمكن أن يحدث خللا تطلع بسهولة PuraMatrix السرير. </li></ul> المواد : دينار بحريني الببتيد RAD16 PuraMatrix هيدروجيل - 1 ٪ (القط # 354250) : إن تركيز الببتيد الإجمالية للخليط مخفف هو 10 ملغ / مل. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المياه Sonicator حمام أو دوامة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 96 - جيدا ثقافة خلية طبق </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلية ثقافة وسائل الإعلام </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معقمة المصفاة H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معقمة المصفاة السكروز 20 ٪ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا (جميع الخلايا في 5000 / إضافة) : OVCAR - 5 </li></ul> يجب تنفيذ جميع الخطوات تحت ظروف معقمة. الإجراء : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصوتن للPuraMatrix 1 ٪ (RAD16) في المياه sonicator الحمام لمدة 30 دقيقة لتقليل اللزوجة قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن الآن حل PuraMatrix 1 ٪ يكون في أنابيب معقمة aliquoted لتبسيط التجارب في المستقبل. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجنب تكون فقاعات الهواء ، وإذا كانت تدور ببساطة شكل أسفل أنابيب معقمة تحتوي PuraMatrix دورة في الدقيقة 1000 (300 x ج) لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيز الببتيد الإجمالية للخليط مخفف هو 10 ملغ / مل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسيتم مطلي مجموعتين من 4 آبار بنسبة 2.5 ملغ / مل و 1.25 ملغ / مل تركيز الببتيد المجموع ، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع PuraMatrix في كل مجموعة بشكل جيد مع 0.2 ميكرون معقمة تصفيتها السكروز 20 ٪ و 13.3 ٪ سكروز لتركيزات الببتيد مجموعه 5 مل / ملغ و 2.5 ملغ / مل على التوالي لتحقيق تركيز 2X من PuraMatrix دينار بحريني في السكروز 10 ٪. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل السكروز 20 ٪ ، 10 غراما من تمييع السكروز ، ثم وحدة التخزين إلى 50 مل من الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن إعداد 13 ٪ و 10 ٪ سكروز تمييع الحل الأسهم 20 ٪. <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السكروز 13 ٪ (مقابل كل مل 10) : 6.5 مل السكروز 20 ٪ + 3.5 مل العقيمة H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 ٪ سكروز (لكل 10 مل) : 5.0 مل السكروز 20 ٪ + 5.0 مل العقيمة H 2 O. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير مزيج سيد الببتيد PuraMatrix استنادا إلى عدد من الآبار التي تنوي لوحة. (انظر المثال أدناه). ثم قسامة في أنابيب الفردية التي تحتوي على 25 مل من مزيج الرئيسي. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي إعداد هذا المزيج الرئيسي في ضعف التركيز النهائي المطلوب من مجموع الببتيد كما سيتم تخفيفه مع حجم مساو من خلايا أثناء الطلاء. <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig11.jpg" alt="الشكل 1" /></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تعليق خلية خلية خلية trypsinizing الثقافات أحادي الطبقة. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن استخدام 2 مل من 0.05 ٪ التربسين EDTA لكل قارورة T - 75. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحييد التربسين من قبل وسائل الإعلام بالإضافة إلى زراعة الخلايا التي تحتوي على 10 ٪ الحرارة المعطل الجنين المصل البقري (استخدم ما لا يقل عن 2 مل من وسائل الإعلام لكل مل من التربسين المستخدمة في الخطوة السابقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا الدقيقة في 1000 (~ 300 x ج) لمدة 5 دقائق لإنشاء خلية بيليه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا في السكروز 10 ٪ العقيمة التي تمت تصفيتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا وتدور مرة أخرى في أسفل دورة في الدقيقة 1000 (~ 300 x ج) لمدة 5 دقائق لإزالة كميات ضئيلة من الملح وجدت في وسائل الإعلام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا OVCAR - 5 في السكروز 10 ٪ في الدورة العاشرة لل2.0 10 5 خلية / مل بحيث الفرز النهائي في الخلية جيدا وسوف 5000 الخلايا في كل بئر. يجب أن يتم تنفيذ الخطوات التالية بسرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ميكرولتر من 25 س 2.0 10 5 خلية / مل تعليق لأنبوب الفرد الأول الذي يحتوي 25 ميكروليتر من مزيج سيد PuraMatrix كما هو موضح في التخطيطي أعلاه. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المزيج بسرعة pipetting (~ 5 مرات صعودا وهبوطا) في أنبوب دون إدخال فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة ثم 50 ميكرولتر الخلية تعليق / PuraMatrix الخليط المناسب من البئر 96 طبق بشكل جيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تهليم من PuraMatrix دينار بحريني من قبل pipetting بلطف ميكرولتر 150 خلية ثقافة وسائل الإعلام (+ 10 ٪ RPMI FBS) إلى جانب البئر <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig12.jpg" alt="الشكل 2" /></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات المذكورة في 8 حتى تم مطلي جميع الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة جدا إزالة برفق ~ 2 / 3 من وسائل الإعلام باستخدام ماصة 200 ميكرولتر للتوازن الرقم الهيدروجيني للهيدروجيل. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا تستخدم الشافطة الكهربائية حيث سيؤدي ذلك إلى تعطيل ماتركس </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان غيض ماصة في البئر بحيثلا تلمس السرير برفق PuraMatrix وإزالة وسائل الاعلام من البئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي الحرص على عدم تعطيل المصفوفة خلال ثقافة الخلايا في PuraMatrix. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة جدا برفق 150 ميكرولتر من خلية ثقافة جديدة وسائل الاعلام الى جانب الخلايا التي تحتوي كذلك مغلفة في PuraMatrix. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير ثقافة وسائل الإعلام في كل خلية ساعة كل 48 جيدا مع وسائل الاعلام ثقافة جديدة بتكرار الخطوات بعناية 10 و 11. </li></ol> ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig1tmb.jpg" alt="الشكل 1" border="0" /> الشكل 1. كانت مغلفة OVCAR - 5 الخلايا كما هو موضح في البروتوكول أعلاه. تم الحصول على الصور باستخدام مجهر مقلوب أوليمبوس FV1000 مجهزة تي DeepSee الأطياف ، فيزياء : الياقوت الليزر ضبطها إلى 750 نانومتر. وأجريت دورات التصوير في أيام 1 و 3 و 5 و 7 بعد الطلاء. واستخدمت مسافة طويلة في العمل ، والمياه غمس الهدف 40X (0.8 أوليمبوس LUMPLFLN NA) لصورة من خلال PuraMatrix. جمعت ثلاثي الأبعاد من خلال الحصول على كميات مداخن الصورة في الخطوات 1.47 ميكرون المحوري. جمعت اثنين من غير descanned كشف عن انبعاث تألق ذاتي باستخدام البنفسجي (440-490 نانومتر) والأخضر (510-550 نانومتر) مرشحات ممر الموجة. تمت معالجة الصور والأفلام النهائي عمق المكدس باستخدام ImageJ عن طريق الجمع بين كل من قنوات الكشف. الرجاء <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1692/1692_fig1.jpg">انقر هنا</a> لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1.

<ol>
	<li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designer+self-assembling+Peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures.">Designer self-assembling Peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS One. 1, e119-e119 (2006).</li></ol>

puramatrix encapsulation of cancer cells

أدلة متزايدة تشير إلى أن زراعة الخلايا السرطانية في ثلاثة أبعاد أكثر دقة يلخص تعقيد البيولوجيا الورم. كثير من هذه النماذج تستخدم تشكيل الغشاء القاعدي المستمدة من الحيوانات التي تحتوي على كميات متفاوتة من عوامل النمو والسيتوكينات التي يمكن أن تؤثر على نمو هذه النماذج ثقافة الخلية. هنا ، نحن تصف بالتفصيل إعداد واستخدام PuraMatrix ، وهي متوفرة تجاريا هلام الذاتي تجميع الببتيد التي تخلو من الحيوانات المستمدة من المواد والعوامل الممرضة لتغليف ونشر الخلايا السرطانية خط المبيض ، OVCAR - 5. نبدأ تصف كيفية إعداد PuraMatrix قبل الاستخدام. المقبل ، ونحن لشرح كيفية مزج صحيح PuraMatrix وتعليق خلية لتغليف الخلايا في هيدروجيل. بالإضافة إلى ذلك على وسائل الإعلام أو الثقافة حقن الخلايا في بيئة الفسيولوجية ، المكون من الببتيد PuraMatrix بسرعة النفس تجمع في هيدروجيل 3D أن يسلك الليفية مقياس النانومتر هيكل مع متوسط ​​حجم المسام من 500-200 نانومتر<sup&gt; 1</sup&gt;. بالإضافة إلى ذلك ، نحن لشرح كيفية نشر الثقافات التي تزرع في PuraMatrix مغلفة. عندما مغلفة في PuraMatrix ، OVCAR - 5 خلايا التجمع في ثلاثة هياكل الابعاد عنيبية أن أكثر شبها مورفولوجيا العقيدات micrometastatic الملاحظة في العيادة في نماذج من المونولاير المختبر. باستخدام المجهر مبائر نوضح ظهور الخلايا ممثل - 5 OVCAR PuraMatrix مغلفة في يوم 1 و 3 و 5 و 7 الطلاء آخر. وينبغي استخدام PuraMatrix على خلايا سرطانية في ثقافة تحسين فهمنا لهذا المرض وتسمح لنا لتقييم الاستجابة للعلاج في النظم نموذج أكثر التنبؤية سريريا.

Watch this Scientific Journal Video about PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells at JoVE.com

PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells

هذا الفيديو يوضح كيفية تغليف الخلايا السرطانية والثقافة في PuraMatrix ، وهي متوفرة تجاريا الذاتي تجميع جل الببتيد.

PuraMatrix تغليف الخلايا السرطانية

Increasing evidence suggests that culturing cancer cells in three dimensions more accurately recapitulates the complexity of tumor biology. Many of these ...

Research

JoVE Journal

Biology

Title Cell Encapsulation by Droplets

عنوان تغليف الخلية عن طريق الرذاذ

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

العزلة وتحليل الخلايا الجذعية المكونة للدم من المشيمة

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Cellular Encapsulation in 3D Hydrogels for Tissue Engineering 

تغليف الخلوية في الهلاميات المائية للهندسة الأنسجة 3D

The 3D encapsulation of cells within hydrogels represents an increasingly important and popular technique for culturing cells and towards the development ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

عزل الخلايا الجذعية من الإنسان Xenografts سرطان البنكرياس

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية الظهارية من الجلد البشري

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

تدفق تنقية الخلوي للخلايا الفأر الانتصافي

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

الثقافة السابقين فيفو من خلايا الإنسان الأولية قناة فالوب طلائي

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal (ICC) Network in Mice

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal ICC Network in Mice

تصور من خلايا خلالية لشبكة (ICC) في الفئران كاجال

The interstitial cells of Cajal (ICC) are mesenchymal derived "pacemaker cells" of the gastrointestinal (GI) tract that generate spontaneous slow waves ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

عزل الخلايا المناعية من الأورام الأولية

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

الاستقراء وتحليل الظهارية الوسيطة الانتقالية ل

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...