Name: split-ubiquitin based membrane yeast two-hybrid (myth) system: a powerful tool for identifying protein-protein interactions
Uploaded: 2010-02-01T16:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions at JoVE.com

نود أن نشكر ادموندز الفجر لقراءة نقدية لهذه المخطوطة. يتم اعتماد مختبر Stagljar من أموال من المؤسسة الكندية للابتكار (CFI) ، والمعهد الكندي للبحوث الصحية (CIHR) ، ومؤسسة القلب والسكتة الدماغية ، وجمعية السرطان الكندية ، وشركة نوفارتيس.

1. معلومات أساسية البروتين البروتين التفاعلات (PPIS) هي كتل البناء الأساسية التي تنظم المشاركة في جميع العمليات الخلوية. وبالتالي ، فمن الضروري أن يتم تنظيم جميع التفاعلات بإحكام من أجل الحفاظ على التوازن الخلوية ، وتحولا في هذا الت?...

<ol>
	<li>Stagljar, I., Fields, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+membrane+protein+interactions+using+yeast-based+technologies.">Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies.</a> Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).</li><li>Iyer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+the+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+system+to+identify+protein-protein+interactions+of+integral+membrane+proteins.">Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system to identify protein-protein interactions of integral membrane proteins.</a> Sci STKE. 275, pl3-pl3 (2005).</li><li>Paumi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+protein-protein+interactions+for+the+yeast+ABC+transporter+Ycf1p+by+integrated+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+analysis.">Mapping protein-protein interactions for the yeast ABC transporter Ycf1p by integrated split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid analysis.</a> Mol Cell. 26 (1), 15-25 (2007).</li><li>Stagljar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+system+based+on+split-ubiquitin+for+the+analysis+of+interactions+between+membrane+proteins+in+vivo.">A genetic system based on split-ubiquitin for the analysis of interactions between membrane proteins in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (9), 5187-5192 (1998).</li><li>Gisler, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+protein-protein+interactions+between+the+mammalian+integral+membrane+transporters+and+PDZ-interacting+partners+using+a+modified+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+system.">Monitoring protein-protein interactions between the mammalian integral membrane transporters and PDZ-interacting partners using a modified split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system.</a> Mol Cell Proteomics. 7 (7), 1362-1377 (2008).</li><li>Scheper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+of+N-glycosylation+and+protein+translocation+across+the+endoplasmic+reticulum+membrane+by+Sss1+protein.">Coordination of N-glycosylation and protein translocation across the endoplasmic reticulum membrane by Sss1 protein.</a> J Biol Chem. 278 (39), 37998-38003 (2003).</li><li>Thaminy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+ErbB3-interacting+factors+using+the+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+system.">Identification of novel ErbB3-interacting factors using the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system.</a> Genome Res. 13 (7), 1744-1753 (2003).</li><li>Johnsson, N., Varshavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Split+ubiquitin+as+a+sensor+of+protein+interactions+in+vivo.">Split ubiquitin as a sensor of protein interactions in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (22), 10340-10344 (1994).</li><li>Kelleher, D. J., Gilmore, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Saccharomyces+cerevisiae+oligosaccharyltransferase+is+a+protein+complex+composed+of+Wbp1p,+Swp1p,+and+four+additional+polypeptides.">The Saccharomyces cerevisiae oligosaccharyltransferase is a protein complex composed of Wbp1p, Swp1p, and four additional polypeptides.</a> J Biol Chem. 269 (17), 12908-12917 (1994).</li><li>Chevallier, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+transcriptional+control+of+a+eucaryotic+permease+gene.">Cloning and transcriptional control of a eucaryotic permease gene.</a> Mol Cell Biol. 2 (8), 977-984 (1982).</li></ol>

الأسطورة هي أول نظام الإنتاجية العالية التي تسمح بتحديد من التفاعلات بين البروتينات الغشاء كامل طول وعصاري خلوي أو غشاء محدد الشركاء. وقد تم استخدامه لدراسة البروتين الغشاء من مجموعة من الكائنات [3-7]. هناك ، ومع ذلك ، والتفاصيل المحددة التي قد تحتاج إلى تمحيص لضمان ال...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Polyethenlene Glycol (PEG3350)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>PEG335</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lithium Acetate Bihydrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LIA001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>XGA001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N`,N-dimethyl formamide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>DMF 451</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-amino-1,2,4-triazole (3-AT)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ATT124</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium phosphate dibasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>SPD307</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium phosphate monobasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FisherBiotech</td>
<td>BP329-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Salmon Sperm DNA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>CA80601-120</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>GLU501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LB Broth LENOX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LBL405</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Nitrogen Base</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>YNB406</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>YEX401</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Peptone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckton Dickinson</td>
<td>211677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-Tryptone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>TRP402</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adenine Sulphate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ADS201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Uracil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>URA241</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Threonine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>THR002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Histidine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>HIS200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Methionine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>MET222</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Valine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>VAL201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Phenylalanine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>PHA302</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Isoleucine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ISO910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Tyrosine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>TYR333</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Leucine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LEU222</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Arginine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ARG006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Tryptophane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FisherBiotech</td>
<td>BP395-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Lysine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LYS101</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Alanine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FisherBiotech</td>
<td>BP369-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>AGR001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Soda Lime Galss Beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioSpec Product</td>
<td>11079105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>SLD002</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

split-ubiquitin based membrane yeast two-hybrid (myth) system: a powerful tool for identifying protein-protein interactions

دفعت الأهمية الأساسية والسريرية البيولوجي للبروتينات الغشاء لا يتجزأ من تطوير نظام الخميرة المستندة لتحديد إنتاجية عالية من البروتين البروتين التفاعلات (PPI) لبروتينات عبر الغشاء كامل طول. تحقيقا لهذه الغاية ، وضعت في مختبرنا تقسيم اليوبيكويتين الخميرة يستند الغشاء الهجين ثنائي (الأسطورة) النظام. تسمح هذه التكنولوجيا للكشف عن البروتين حساس للتفاعلات عابرة ومستقرة به<em&gt; السكيراء الجعوية</em&gt; بوصفها الكائن المضيف. الأسطورة يستفيد من الملاحظة التي يمكن فصلها إلى قسمين اليوبيكويتين شاردات مستقرة : C - النصف النهائي للخميرة اليوبيكويتين (C<sub&gt; UB</sub&gt;) والنصف N - محطة للشاردة اليوبيكويتين (N<sub&gt; UB</sub&gt;). في الأسطورة ، ويتم تكييف هذا المبدأ لاستخدامها بوصفها &quot;الاستشعار&quot; من البروتين البروتين التفاعلات. باختصار ، هو تنصهر الطعم الغشاء لا يتجزأ من البروتين إلى C<sub&gt; UB</sub&gt; الذي يرتبط إلى عامل النسخ الاصطناعية. البروتينات الفريسة ، سواء في شكل فردي أو مكتبة ، وتنصهر في N<sub&gt; UB</sub&gt; شاردة. التفاعل بين البروتين الطعم وفريسة يؤدي إلى إعادة تشكيل شاردات اليوبيكويتين ، وتشكيل كامل طول &quot;الزائفة اليوبيكويتين&#39; الجزيء. هذا الجزيء هو بدوره معترف بها من قبل الإنزيمات deubiquitinating عصاري خلوي ، مما أدى إلى انشقاق عامل النسخ ، وتحريض لاحقة في التعبير الجيني المراسل. النظام قابل للتكيف إلى حد كبير ، وخاصة مناسبة تماما لفحص سرعة عالية. وقد استخدمتها بنجاح لتحقيق التفاعل باستخدام بروتينات الغشاء لا يتجزأ من كل من الخميرة وغيرها من الكائنات.

Watch this Scientific Journal Video about Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions at JoVE.com

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

الأسطورة يسمح للكشف حساسة للتفاعلات عابرة ومستقرة بين البروتينات التي يتم التعبير عنها في البيرة الكائن السكيراء النموذج. وقد تم تطبيقه بنجاح لدراسة خارجية والخميرة بروتينات الغشاء لا يتجزأ من أجل تحديد شركائهم التفاعل بطريقة إنتاجية عالية.

انقسام اليوبيكويتين الخميرة يستند الغشاء الهجين ثنائي (الأسطورة) النظام : أداة قوية لتحديد البروتين البروتين التفاعلات

The fundamental biological and clinical importance of integral membrane proteins prompted the development of a yeast-based system for the high-throughput ...

Research

JoVE Journal

Biology

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid (MYTH) System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

التصوير البروتين البروتين التفاعلات في الجسم الحي</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Associated Chromosome Trap for Identifying Long-range DNA Interactions

يرتبط فخ كروموسوم لتحديد الحمض النووي تفاعلات طويلة المدى

Genetic information encoded by DNA is organized in a complex and highly regulated chromatin structure.  Each chromosome occupies a specific territory, ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

تعديل الخميرة اثنين والهجين نظام لتحديد البروتينات التفاعل مع عامل النمو Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

بروتوكول لتحديد البروتين البروتين التفاعلات على أساس<sup&gt; 15</sup&gt; N صفها الأيض، مناعي، الكمي والتحوير الطيف الكتلي الانجذاب

Protein-protein interactions are fundamental for many biological processes in the cell. Therefore, their characterization plays an important role in ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

تحديد البروتين البروتين التفاعل في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; رؤساء الكبار حسب جنبا الى جنب الانجذاب تنقية (وات)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Reverse Yeast Two-hybrid System to Identify Mammalian Nuclear Receptor Residues that Interact with Ligands and/or Antagonists

عكس الخميرة نظام هجين اثنين من التعرف على الثدييات مستقبلات النووية التي تتفاعل مع بقايا تقوم الليجندات و / أو الخصوم

As a critical regulator of drug metabolism and inflammation, Pregnane X Receptor (PXR), plays an important role in disease pathophysiology linking ...

Capture Compound Mass Spectrometry - A Powerful Tool to Identify Novel c-di-GMP Effector Proteins

التقاط الطيف الكتلي - أداة قوية لتحديد رواية ج-دي-GMP المستجيب البروتينات

Considerable progress has been made during the last decade towards the identification and characterization of enzymes involved in the synthesis ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

التحقيق البروتين البروتين التفاعلات في الخلايا الحية باستخدام الرنين ضوء بارد نقل الطاقة

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

التحقيق عالية الكثافة ميكروأرس البروتين وظيفية لكشف البروتين البروتين التفاعلات

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

تحديد مواقع التفاعل البروتين البروتين عن طريق الببتيد صفائف

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...